Predição da resposta ao estímulo ovariano controlado através da detecção de microRNAs circulantes em soro de pacientes de reprodução humana assistida

As técnicas de Reprodução Humana Assistida (RHA) tem sido usadas por muitos casais que sofrem de infertilidade conjugal. A Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI) é a técnica mais utilizada devido a eficácia no tratamento. Para tanto as pacientes passam pelo protocolo de Estímulo Ovariano Controlado (EOC) para que ocorra a recuperação oocitária, porém observa-se respostas variadas aos protocolos de EOC, desde ausência até hiperestímulo ovariano, ocorrendo complicações clínicas do tratamento. A dosagem de marcadores séricos é utilizada para a otimização do protocolo de EOC, melhorando a qualidade oocitária e diminuindo os riscos, no entanto ainda há cancelamento de ciclos de RHA. Estudos sugerem o papel biológico de microRNAs (miRNAs) no controle das funções ovarianas. Além disso, já foi vista a alteração da expressão de miRNAs em plasma sanguíneo e fluido folicular de modelo animal submetidos ao EOC. No entanto, o potencial destas moléculas como marcadores preditores de resposta ao EOC para tratamento da infertilidade permanece pouco esclarecido. Assim, este projeto buscou avaliar o potencial preditivo de miRNAs circulantes, em soro de pacientes submetidas a ciclos de RHA, em resposta ao EOC. Para isso, foi coletado sangue periférico de pacientes, antes do estímulo ovariano e, após o EOC, as amostras de soro foram classificadas em: grupo (1) normorrespondedora (NR); (2) hiper resposta (HR); (3) pobre resposta (PR). A fração de pequenos RNAs foi isolada do soro e submetida à detecção de miRNAs em larga escala por Arranjo de qPCR, na qual 24 miRNAs apresentaram detecção diferencial entre os grupos. Deste miRNAs, 10 foram selecionados para validação posterior em coorte independente de pacientes, sendo os miRNAs miR-150-5p, miR-223-3p, let-7d-3p, miR-891a-5p, miR-99a-3p, miR-200c-5p candidatos a preditores de pobre resposta (PR) e miR-181d-5p, miR99a-5p, miR-221-3p, miR-92a-1-5p, candidatos de resposta exacerbada (HR). Apenas o miRNA miR-181d-5p apresentou diferença de expressão entre os grupos, tendo níveis significativamente mais elevados no grupo HR em comparação ao PR (p = 0,0001) e NR (p = 0,0079), e correlação positiva com aspectos clínicos importantes como o número de folículos aspirados (p<0,0001), oócitos recuperados (p<0,0001) e oócitos maduros (p=0,0002). Além disso, mostrou-se ser um preditor independente para a hiper resposta tanto com relação a NR (p=0.002, AUC=0.739), quanto PR (p<0.0001, AUC=0.824), com especificidade de 86,2% e sensibilidade de 45%. O miR-181d-5p tem como alvos preditos membros chaves de vias de sinalização importantes para a reprodução feminina como o receptor de estrógeno (ESR1) e progesterona (PGR), fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGF1), adenilato ciclase 1 (ADCY1) e epiregulina (EREG). Assim, os resultados indicam que a quantificação dos níveis séricos do miR-181d-5p pode contribuir com a predição da resposta exacerbada ao Estímulo Ovariano Controlado (AU)