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Identificação de pericitos no ligamento periodontal e sua caracterização como células mesenquimais indiferenciadas

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Autor(es):
Mércia Jussara da Silva Cunha
Número total de Autores: 1
Tipo de documento: Tese de Doutorado
Imprenta: Piracicaba, SP.
Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Data de defesa:
Membros da banca:
Karina Gonzales Silverio; Bruna Rabelo Amorim; Ruthinéia Diógenes Alves Uchôa Lins; Denise Carleto Andia; Francisco Humberto Nociti Junior
Orientador: Karina Gonzales Silverio
Resumo

Não está claro na literatura que as células do ligamento periodontal (PDL), caracterizadas como células mesenquimais indiferenciadas (MSC), correspondem as mesmas populações celulares identificadas como pericitos. Além disso, não existem evidências a respeito da distribuição destas células nos tecidos periodontais saudáveis e acometidos pela doença periodontal inflamatória crônica (DPIC). Sendo assim, este estudo teve como objetivos: 1) isolar e caracterizar fenotipicamente populações de pericitos provenientes do PDL de humanos e 2) avaliar a distribuição dos pericitos/MSC nos tecidos periodontais saudáveis e acometidos pela DPIC. Para isso, populações de pericitos (células CD146+) foram purificadas a partir de três populações celulares do PDL e as porções positivas e negativas foram caracterizadas quanto: 1) fenótipo mesenquimal indiferenciado (expressão dos marcadores CD105, CD166, STRO-1 e OCT-4) e fenótipo endotelial/hematopoiético (expressão dos marcadores CD34 e CD45) pela citometria de fluxo, 2) expressão do OCT4/POU5F1 pela imunocitoquímica e 3) potencial para diferenciação em fenótipo osteoblástico (ensaio de mineralização pelo vermelho de alizarina e expressão dos genes para RUNX-2, ALP e OCN pelo PCRq) e adipogênico (coloração do oil red O e expressão dos genes para PPAR?2 e LPL). Para determinar o padrão de distribuição das células CD146+, CD166+, STRO-1+ nos tecidos periodontais, foi utilizado um modelo in vivo de indução experimental de DPIC, inserindo ligaduras de algodão subgengivalmente, no 1º molar inferior de 20 ratos Wistar machos. O molar contralateral serviu de controle (saudável). Após os períodos de 3 e 14 dias, os animais foram sacrificados, suas mandíbulas foram processadas e cortes histológicos foram analisados por histometria e imunohistoquímica. A análise de citometria de fluxo confirmou a eficiência da separação magnética com 95,14% (+ 2,46%) das células expressando o marcador CD146. Mais de 90% das células PDL-CD146+ co-expressaram os marcadores CD105 e CD166. Somente uma das populações PDL-CD146+ não expressou o marcador CD166, contudo foi a única a expressar o STRO-1 e o fator de transcrição OCT4/POU5F1. Todas populações celulares PDL-CD146+ apresentaram potencial de diferenciação osteoblástica/cementoblástica com aumento significativo da expressão de RUNX2, ALP e OCN (p < 0,05), o que não ocorreu nas populações celulares PDL-CD146-. Quando submetidas à diferenciação adipogênica, somente a população PDL-CD146+ CD105+ CD166- STRO1+ OCT4+ foi capaz de diferenciar-se em células semelhantes a adipócitos, mostrando aumento significativo na expressão de genes específicos (LPL e PPAR?2) (p < 0,05). Avaliando o padrão de distribuição das células CD146+, CD166+ e STRO-1+, observa-se que elas apresentam-se distribuídas na região do ligamento e tecido conjuntivo, próximas ao cemento radicular e tecido ósseo. Também foram visualizadas na parede dos vasos sanguíneos e aglomeradas próximas a eles, dando indícios de que estes possam ser seus nichos. Os achados deste estudo mostraram que somente as células que expressam concomitantemente os antígenos de superfície CD146 e STRO-1 e o fator de transcrição OCT4/POU5F1 são capazes de diferenciarem-se em osteoblastos e adipócitos. As células PDL-CD146- não possuem a característica de multipotencialidade. Células imunomarcadas para os antígenos CD146, CD166 e STRO-1 encontram-se distribuídas no PDL e no espaço perivascular dos dentes com saúde e doença periodontal (AU)

Processo FAPESP: 14/14472-4 - Identificação de pericitos no ligamento periodontal e sua caracterização como células mesenquimais indiferenciadas
Beneficiário:Mércia Jussara da Silva Cunha
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado