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Determinação dos sítios de fosforilação na cauda da molécula de BM-V

Processo: 00/02379-7
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de maio de 2000
Vigência (Término): 30 de abril de 2002
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Roy Edward Larson
Beneficiário:Maria Cristina da Silva Pranchevicius
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Cálcio   Calmodulina   Calpaína   Fosforilação   Miosina tipo V
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Calcio | Calmodulina | Calpaina | Camk-Ii | Fosforilacao | Miosina-V

Resumo

A miosina da classe V isolada de cérebro de vertebrados, é uma miosina não convencional que possui três domínios: O domínio cabeça ou motor que corresponde a região N-terminal da molécula e contém sítios de ligação à actina e ao ATP. O domínio pescoço que contém 6 repetições do motivo estrutural IQ que servem como sítios de ligação para cadeias leves e calmodulina, proteínas regulatórias do tipo "E-F hand". E o domínio cauda que é a região menos conservada da molécula; sua maior parte é globular com intercalações de porções em alfa-hélice dupla possuindo uma cadeia leve característica de dineínas. Várias propriedades bioquímicas dos domínios cabeça e pescoço já foram elucidadas como: atividades ATPásicas, ligação com a F-actina, regulação pelo Cálcio, entre outras. Quanto ao seu domínio cauda suas funções ainda não foram bem esclarecidas. Estudos anteriores demonstraram que essa região pode ser clivada por uma cisteína protease, denominada calpaína, gerando um fragmento de 80 k Da, que é fosforilada pela proteína quinase II dependente de Ca+2 calmodulina (CaMK-II). O presente projeto propõe identificar o(s) sítio(s), no domínio cauda de BM-V, fosforilado(s) pela CaMK-II, visando sua caracterização como um fator na regulação das funções do domínio cauda. Se conseguirmos determinar o(s) sítio(s) de fosforilação poderemos gerar anticorpos específicos para esta sequência e começar a elucidar algumas das funções desse domínio pouco conhecidas. (AU)

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