Caracterização do ciclo nucleolar e da formação do corpo cromatóide na espermatogênese de alguns vertebrados

Resumo

Diversos organismos têm desenvolvido mecanismos moleculares que permitem a sincronização de sua fisiologia com o ciclo diário de 24 horas. Esse controle circadiano das atividades fisiológicas se localiza principalmente no núcleo supraquiasmático (SCN) do hipotálamo, sendo considerado o clock circadiano central, mas também são encontrados em diversos tecidos periféricos. De um ponto de vista molecular, os ritmos circadianos são regulados por mecanismos cíclicos de feedback, transcricional e pós-traducional, gerados por um conjunto de proteínas que são denominadas proteínas clock. As principais proteínas clock são conhecidas como CLOCK e BMAL1, que são fatores de transcrição que se heterodimerizam e induzem a expressão de uma variedade de genes controlados por esse clock. Em mamíferos, esse clock circadiano influência praticamente todos os processos fisiológicos e de comportamento, incluindo os ciclos sono-atividade, atividade cardiovascular, atividade do sistema endócrino, temperatura do corpo, atividade renal, fisiologia do trato gastrointestinal, metabolismo hepático, e também a reprodução, atuando principalmente da produção e liberação dos hormônios reprodutivos. Avaliações macro e microscópicas da anatomia reprodutiva em ambos os sexos de camundongos Bmal1 knockouts (KO) demonstraram que esses camundongos possuem deficiência no processo de esteroidogênese, sendo, portanto, estéreis. Sendo assim, o objetivo desse projeto será detectar se a infertilidade causada pela ausência da proteína Bmal1 nos camundongo Bmal1 KO está relacionada com o processo de formação do chromatoid body (CB), que é uma estrutura citoplasmática presente nas células germinativas masculinas e que desempenha um importante papel durante os processos de espermatogênese e espermiogênese sendo, portanto, imprescindível para a determinação da fertilidade. As análises da formação e da composição do CB serão realizadas por meio de imunofluorescência, imunoblot e PCR em tempo real. (AU)