Molecular regulation of axial skeletal muscle patterning during mouse embryogenesis

Resumo

O locus da cadeia leve de Miosina têm sido intensamente estudado pelo laboratório da Dra. Rosenthal. Camundongos transgênicos expressando CAT sob o controle do promotor da Miosina leve e de seu enhancer foram gerados e apresentaram um inesperado gradiente de expressão do transgene ao longo da musculatura axial. A expressão de CAT é progressivamente maior em músculos intercostais e este gradiente representa um dos primeiros marcadores para a especificação funcional de músculo esquelético. O objetivo do projeto é definir "in vivo" o conjunto de fatores cis necessários para a expressão do gradiente. O objetivo será perseguido através da eliminação tecido específica de subseqüências do enhancer da Miosina leve através de metodologias que permitem o controle temporal da excisão de seqüências nucleotídicas. A excisão tecido-específica será realizada através da metodologia do Cre-loxP e o controle temporal do evento será tentado com o uso de promotores reguláveis por tetraciclina recentemente desenvolvidos. Os estudos envolverão a geração de pelo menos 3 linhagens transgênicas, uma com a subseqüência entre 2 sitios loxP, outra com a Cre recombinase controlada por um promotor tecido-específico induzido por tetraciclina e por fim, outra linhagem expressando o tet transativador. Os animais serão intercruzados e a deleção será induzida pela administração de tetraciclina, possibilitando assim o estudo do papel de subseqüências nucleotídicas do enhancer da miosina leve no estabelecimento do gradiente de CAT. (AU)