Lmasf1: estudo de um gene de regiao telomerica de "leishmania major" com potencial funcao anti-silenciadora.

Resumo

Durante o Doutorado, trabalhamos na caracterização de clones que representam as extremidades de três cromossomos de Leishmania major e o seqüenciamento do cosmídeo que representa uma das extremidades do cromossomo 20 revelou a presença de 10 fases abertas de leitura (ORFs). Uma destas ORFs apresentou homologia com um gene de S. cerevisae, denominado ASF1 (Anti-Silencing Function 1), que está envolvido na desrepressão transcricional das extremidades dos cromossomos de levedura. Neste projeto, propomos avaliar a participação do homólogo do gene ASF1 em Leishmania (LmASFI) nas diferentes formas de diferenciação do parasito. Pretendemos demonstrar a função do gene LmASFI a partir de uma estratégia clássica de determinação de função, baseada no aumento dos níveis de expressão do gene LmASFI e em sua remoção do genoma da Leishmania, por recombinação homóloga. Paralelamente, construiremos um vetor para inserção de uma marca de seleção na região telomérica do cromossomo 20 para avaliar a função anti-silenciadora. Finalmente, com o objetivo de estudar a participação de LmASFI na diferenciação de formas promastigotas em amastigotas, avaliaremos a capacidade do mutante que super-expressa LmASFI e do mutante nulo em produzir lesão em um modelo murino de leishmaniose. (AU)