Caracterizacao de glicosaminoglicanos em mitocondrias e sua interacao com "citocromo c".

Resumo

Este projeto objetiva demonstrar a presença glicosaminoglicanos sulfatados (GAGS) na membrana mitocondrial externa. A presença de GAGS em mitocôndrias será determinada através da marcação metabólica dos proteoglicanos e glicoproteínas sulfatadas com [35S]-sulfato. Posteriormente, será feita uma comparação com mitocôndrias da linhagem de células CHO selvagens (linhagem K1) e mutantes defectivas de GAGS (linhagem 756). Paralelamente serão feitos estudos de alterações estruturais em citocromo c induzidas por GAGS na presença e na ausência de sistemas modelo de membrana (lipossomos). Serão utilizados diferentes tipos de GAGS tais como heparina, dermatam sulfato, condroitim sulfato, heparam sulfato e ácido hialurônico. As alterações estruturais serão monitoradas através de espectroscopia UV-visível, fluorescência e dicroísmo circular (CD). Estas técnicas permitirão determinar alterações na estrutura secundária e terciária da fração proteica de citocromo c, bem como em seu grupo prostético, o heme. Será também investigado o papel de GAGS como trapeadores de radicais livres e espécies excitadas geradas pela atividade peroxidase de citocromos. Para tanto, analisaremos o comportamento de uma reação modelo de citocromo c com aldeídos (citocromo c x difenilacetaldeído) na presença de GAGS. Serão monitorados, a cinética de redução de citocromo c. o consumo de oxigênio e a quimiluminescência na Dresenca de GAGS. (AU)