Análise do efeito da fototerapia com laser em baixa intensidade em células-tronco de polpa dentária humana de dente decíduo (SHED-LacZ): Estudo in vitro e in vivo da produção de proteínas da matriz dentinária

Resumo

O tratamento endodôntico visa manter no sistema estomatognático um elemento dental que apresenta quadro pulpar de inflamação irreversível ou necrose. Tais condições são normalmente decorrentes de trauma dental severo ou lesões de cárie extensas. Quando isto ocorre em dentes permanentes imaturos, a perda da vascularização com consequente necrose da polpa dentária cessa o processo de formação radicular. Terapia celular viabilizando a formação de novo tecido pulpar nestes dentes permitiria a continuação da formação dentinária radicular e, por conseguinte, a finalização desse processo. Estudos na área de engenharia tecidual, no intuito de se conhecer os mecanismos de proliferação e diferenciação de células-tronco são de grande valia para seu futuro emprego em terapia celular. A polpa dental é um tecido frouxo composto por células e matriz extracelular (MEC) que tem como funções primordiais formação, proteção e nutrição da estrutura dental. Estudos mostraram que células indiferenciadas da polpa podem atuar como células-tronco adultas, capazes de se diferenciarem em diversos tipos celulares. O potencial de utilização de células-tronco de polpa para terapia celular em dentes que tiveram sua formação radicular interrompida e que necessitam de tratamento endodôntico é imenso e, dessa forma, há um grande interesse em isolar e estudar essas células. Outra terapia que poderia ser agregada à terapia celular é a fototerapia com laser em baixa intensidade (FTLBI). De fato, a FTLBI tem se demonstrado capaz de modular o crescimento, a viabilidade celular, a diferenciação e o processo de síntese e secreção de proteínas de tipos celulares como fibroblastos, osteoblastos e células endoteliais. Vale ressaltar que o aumento da viabilidade celular passa a ser um aspecto importante para as células-tronco, principalmente quando o objetivo do cultivo das mesmas é sua implantação em órgãos humanos durante as terapias celulares. Alguns estudos in vitro já exploraram os efeitos da FTLBI em células-tronco de origem mesenquimal, a exemplo das células-tronco de medula óssea e as derivadas de tecido adiposo. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos da FTLBI em células-tronco provenientes da polpa dentária humana. O entendimento de como estimular o crescimento, diferenciação, bem como a síntese, produção e secreção das proteínas da matriz extracelular nestas células possibilitará futuramente estudos de regeneração de tecidos dentais. Portanto, o objetivo deste projeto é avaliar a influência da FTLBI no crescimento e na produção das proteínas da matriz dentinária por uma linhagem de células-tronco adultas originária de polpa de dente decíduo humano (SHED-LacZ). Mais especificamente pretendemos estudar in vitro a proliferação e a expressão de proteínas da MEC relacionadas à dentinogênese das células SHED-LacZ irradiadas e não irradiadas. Para tanto serão utilizadas as técnicas de análise de viabilidade celular (redução do MTT), imunofluorescência, Western-blot e citometria de fluxo. Adicionalmente, estudaremos in vivo as características morfológicas e ultra-estruturais do tecido formado no interior de fatias de raízes dentais humanas contendo células SHED-LacZ em scaffolds biodegradáveis implantadas em dorso de camundongos imunossuprimidos. Para este estudo serão empregadas a técnica histológica (coloração de rotina e de ²-galactosidase), imunoistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão. Finalmente, será avaliada a influência da FTLBI pré e pós implante nas características morfológicas do mesmo tecido. Os dados numéricos serão comparados estatisticamente por teste a ser definido pela análise da normalidade dos resultados, enquanto os dados de morfologia e ultra-estrutura serão apresentados de forma qualitativa e/ou ilustrativa.