Bolsa 09/15919-4 - Células-tronco embrionárias, Pluripotência - BV FAPESP
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Derivação de linhagem de células-tronco embrionárias fluorescentes verdes, oriundas de camundongo C57BL/6/EGFP

Processo: 09/15919-4
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2009
Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2010
Área de conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Marcelo Fábio Gouveia Nogueira
Beneficiário:Bruna Castilho Soto Campanha
Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:06/06491-2 - Quimerismo embrionário nas espécies murina e bovina: interação da massa celular interna, de embriões produzidos in vivo, com embriões receptores produzidos in vitro, AP.JP
Assunto(s):Células-tronco embrionárias   Pluripotência   Mus musculus   Embrião
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:células-tronco embrionárias | c57bl | Egfp | embrião | Mus musculus | pluripotência | 6 | Células-tronco embrionárias

Resumo

O domínio do conhecimento técnico, para a derivação e a manutenção de células-tronco embrionárias (CTE), é fundamental para a nucleação de um grupo de pesquisa que envolva os grandes temas como pluripotência, terapia celular, diferenciação e quimerismo. Desse modo, a aquisição do "know-how" para a derivação de CTE - em linhagem dita resistente à sua obtenção, como a C57Bl/6 - e que, além disso, contenha um marcador endógeno como a proteína fluorescente verde (EGFP), seria uma ferramenta extremamente valiosa para a base de conhecimento científico de um grupo que trabalhe nesta área. Blastocistos obtidos de fêmeas murinas transgênicas (linhagem C57BL/6/EGFP, fluorescentes de forma constitutiva em todos os tecidos) serão submetidos à remoção da zona pelúcida (remoção mecânica) e cultivados diretamente em placas "96-well" Nunc contendo meio para derivação de células-tronco (RESGRO, Millipore®) e monocamada de células "feeder" (fibroblastos murinos inativados mitoticamente, PMEF, Millipore®). Após 5 a 6 dias, as prováveis colônias aderidas à monocamada serão avaliadas quanto à morfologia, repicadas somente aquelas com características de tronco-embrionárias (dissecção mecânica da colônia com exclusão das células periféricas com morfologia semelhante ao trofectoderma) e cultivadas até o 9° dia para uma nova passagem. Após a terceira passagem (14° dia de cultura), aquelas linhagens que estiverem com crescimento compatível serão avaliadas morfologicamente (relação núcleo/citoplasma), quanto à diploidia, marcadores funcionais (fosfatase alcalina e Oct-3/4) e fluorescência verde das mesmas. Desse modo, o objetivo geral deste projeto é obter uma linhagem estável de células-tronco embrionárias murina, que seja pluripotente e contenha um marcador fluorescente (EGFP). Como objetivos específicos, estão a aquisição de "know-how" para a derivação de células-tronco embrionárias murinas e testar a derivação de células-tronco embrionárias de linhagem refratária (C57BL/6).

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