Estudo de mutagênese sítio-dirigida da enzima diidroorotato desidrogenase de Leishmania major

Resumo

Os nucleotídeos desempenham uma variedade de funções na célula. Além de serem unidades básicas de ácidos nucléicos, DNA e RNA, são essenciais no metabolismo celular em geral, pois atuam como transportadores de energia química, são componentes de muitos cofatores, participam na ativação de açúcares para a glicosilação pós-traducional de proteínas e lipídeos e alguns ainda são mensageiros celulares secundários.Inibidores da via de novo de biossíntese de nucleotídeos têm sido, recentemente, utilizados como um importante grupo de agentes quimoterápicos atuando como antiproliferativos, antiinflamatórios e antiparasitários. Um alvo promissor na tentativa de reduzir o nível intracelular de nucleotídeos de pirimidina é a enzima diidroorotato desidrogenase (DHODH), uma enzima que participa na quarta etapa da via de novo de biossíntese de nucleotídeos de pirimidina, catalisando a oxidação da molécula L-diidroorotato a orotato. Esse mecanismo é dependente do mononucleotídeo flavina (FMN) e de receptores de elétrons que variam de acordo com o organismo.A Leishmania é um protozoário parasita flagelado responsável pela Leishmaniose, uma doença que afeta 88 países distribuidos em 4 continentes (África, Ásia, Europa, América do Norte e América do Sul) e causa um risco a 350 milhões de pessoas.A enzima DHODH do parasito Leishmania major teve recentemente sua estrutura resolvida em nosso laboratório, além de sua completa caracterização cinética. Com o objetivo de dar continuidade a este trabalho, o presente projeto visa a caracterização da relação estrutura-função da LmDHODH através da combinação de técnicas de mutagênese sítio-dirigida, ensaios de cinética enzimática, e determinação da estrutura por técnicas de difração de raios-X.