Determinacao dos sitios subcelulares de producao de especies reativas de oxigenio e oxido nitrico em cultura de celulas musculares utilizando sondas fluorescentes e sua aplicacao in vivo em ...

Resumo

As EROs e NO exercem funções importantes no tecido muscular, como a regulação do fluxo sanguíneo, metabolismo de glicose e da força de contração. Contudo, pouco se sabe sobre a formação intracelular dessas espécies durante a atividade muscular. Evidências da produção dessas espécies in vivo são escassas devido à instabilidade dessas e a falta de um método adequado à situação experimental. A nossa proposta é de avaliar a participação das mitocôndrias, da enzima xantina oxidase (XO) e dos peroxissomos na produção subcelular de EROs e da enzima óxido nítrico sintase (NOS) na formação de NO durante contrações intensas in vitro utilizando cultura de células musculares. A produção mitocondrial de EROs será determinada com as sondas DCFH-DA e "MitoTracker Red". A participação da XO na produção intracelular de EROs será examinada através do inibidor da XO alopurinol. A participação dos peroxissomos será examinada pela incubação das células com ácidos graxos de cadeia longa, que se eleva no exercício. Para a identificação dos sítios de produção de NO inibidores da enzima óxido nítrico sintase serão utilizados com a sonda DAF-2-DA. Em adição, a determinação de EROs e NO será realizada in vivo, utilizando ratos e humanos. A determinação de NO e H2O2 será realizada com as sondas DAF-2-BSA e DCFH-BSA em combinação com a técnica de microdiálise. (AU)