Estudo de especificidade e desenvolvimento de inibidores para as calicreinas hk1, hk5, hk6 e hk7.

Resumo

As calicreínas teciduais humanas são enzimas da família das serino peptidases encontradas em diversos tecidos e fluídos corporais, e estão associadas a vários tipos de câncer e outras doenças. O papel fisiológico dessas enzimas ainda não está esclarecido, portanto, a caracterização bioquímica dessas proteases é de elevada importância, uma vez que pode fornecer informações importantes sobre seus substratos específicos, de suas participações em cascatas proteolíticas e de suas potenciais aplicações clínicas, seja como alvos terapêuticos ou como possíveis marcadores tumorais. Em vista disso, o objetivo deste trabalho é caracterizar a especificidade de quatro enzimas da família das calicreínas: KLK1, KLK5, KLK6 e KLK7, utilizando bibliotecas de phage display e de peptídeos sintéticos de fluorescência apagada, além da síntese de inibidores peptidicos contendo aminoácidos não naturais. As enzimas a serem estudadas serão obtidas por meio do sistema de expressão em células de insetos, que é apropriado para obtenção de proteínas recombinantes eucarióticas similares às produzidas em células de mamíferos. As bibliotecas combinatórias de peptídeos de fluorescência apagada para caracterização da especificidade de proteases estão bem estabelecidas em nossos laboratórios, e o sistema phage display tem tido sucesso na identificação de epitopos específicos de anticorpos, substratos para enzimas, proteínas ligantes de DNA, peptídeo ligante para proteínas e receptores. Neste projeto estaremos pela primeira vez fazendo uso simultâneo de duas técnicas poderosas de identificação de substratos de proteases. Além disso, anticorpos poli e monoclonais serão preparados. (AU)