Estudo comparativo das proteínasenvolvidas no transporte placentário em clones bovinos pela técnica de western blotting

Resumo

Aproximadamente 82% dos bovinos clonados por transferência nuclear não sobrevivem entre o 30º e 90º dias de prenhez. Tal evento resulta da redução na taxa de implantação e do aumento na taxa de mortalidade fetal, possivelmente em razão da expressão errônea de genes necessários para sustentar o desenvolvimento normal. As perdas gestacionais foram relacionadas a um corioalantóide rudimentar e alterações nos fatores que promovem o crescimento placentário e vascular. Considerando a importância de algumas proteínas específicas na migração celular e transporte placentário, o presente projeto tem como objetivo geral fazer um estudo comparativo de algumas que possivelmente estejam envolvidas em tais eventos. O estudo de tais proteínas será realizado mediante um modelo inédito com as células fetais expressando a proteína fluorescente verde (GFP). A utilização da proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo da interação materno-fetal, visto que possibilitará o mapeamento diferenciando das células fetais e maternas. Com o auxílio deste modelo, pretende-se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto. Para tanto, utilizaremos 08 úteros gestantes provenientes de bovinos clonados, 08 de bovinos de fertilização in vitro (FIV) e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) ou monta natural com idade até 90 dias de gestação, os quais terão seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e recuperação do útero gestante. Serão coletadas as membranas fetais (âmnio, alantóide e cório), placentônios, carúnculas e áreas intercarunculares. Pelo emprego da técnica de Western Blotting, serão avaliadas as proteínas: calveolina 1, -2 e -3. A hipótese do presente estudo é que tais proteínas envolvidas no transporte placentário estarão presentes em menor quantidade nos materiais provenientes das gestações obtidas a partir dos clones.