Desenvolvimento de sistema heterólogo para expressão funcional de receptores olfatórios (ORs) humanos

Resumo

Os odorantes são detectados por uma grande família de receptores olfatórios (ORs) que são expressos nos neurônios olfatórios localizados no nariz. Os ORs ativados por um determinado odorante irão acoplar a proteína Galfaolf que promove à a ativação da adenilil ciclase III e produção de AMPc. Essa produção irá ativar canais tônicos dependentes de AMPc e, como conseqüência o neurônio olfatório será. despolarizado. A informação desencadeada pela ativação de determinados ORs é então transmitida para regiões específicas do cérebro promovendo a percepção do odorante. A determinação da especificidade dos ORs para diferentes odorantes irá contribuir para o melhor entendimento de como estes são discriminados pelo sistema olfatório, entretanto poucos ORs tiveram seus ligantes definidos devido à dificuldade de expressão funcional de ORs em sistema heterólogo. Potenciais novos reguladores para Galfaolf foram identificados em nosso laboratório, dentre eles está Ric-8B que é capaz de interagir com Galfaolf e potencializar a atividade da mesma. Nossos resultados demonstraram que a expressão de Ric-8B é capaz de aumentar o acúmulo de Galfaolf na periferia de células HEK-293T. Estes resultados sugerem fortemente que o uso de Ric-8B em um sistema em larga escala poderá permitir a expressão funcional de diversos ORs promovendo a identificação de seus respectivos ligantes. Neste projeto propomos o uso do sistema CRE-SEAP para a expressão de um grande número de ORs humanos em sistema heterólogo utilizando a proteína Galfaolf e Ric-8B em associação com a proteína acessória RTP-1S. Propomos o estudo de subfamílias de ORs que estão presentes somente no repertório de ORs humanos com o objetivo de determinar quais são os ligantes que ativam esses ORs. Uma hipótese é que esses ORs sejam necessários para a detecção de feromônios humanos ou para a identificação de odorantes importantes para o homem. Também propomos a determinação da existência de polimorfismos nestas subfamílias de ORs na tentativa de correlacionar estas variações com possíveis mudanças de especificidade dos mesmos. (AU)