Avaliação da expressão de proteína transportadora de glicose GLUT4 em músculo solear de ratos fumantes passivos sedentários e exercitados

Resumo

Acredita-se que atualmente o tabaco é a droga mais utilizada e disseminada no mundo. A obstrução pulmonar que ocorre em função do tabagismo é freqüentemente progressiva e associada a uma resposta inflamatória incomum do pulmão aos gases nocivos presentes na fumaça do cigarro. Essa resposta inflamatória também atinge os músculos perifericamente, uma vez que os mediadores da inflamação presentes no pulmão entram na circulação sanguínea. Além disso, dentre os inúmeros malefícios causados pelo fumo, há evidências de que o cigarro aumenta a concentração da gordura abdominal, promovendo a acentuação da dislipdemia e reduzindo a sensibilidade à insulina, com alterações no transporte de glicose. Reduções na expressão do transportador de glicose têm sido associadas à instalação de obesidade e de inflamação. Os transportadores de glicose, presentes em todos os tecidos, regulam o metabolismo de glicose, porém a isoforma 4 (GLUT4) expressa principalmente no músculo esquelético, tecido adiposo e coração está intimamente envolvida no transporte de glicose insulino-estimulado. A atividade contrátil é uma grande estimuladora da translocação de GLUT4 para a membrana plasmática da célula muscular, melhorando assim o transporte de glicose mesmo em modelos de resistência à insulina. O presente estudo irá investigar o efeito do tabagismo sobre a expressão do GLUT4 no músculo sóleo de ratos fumantes passivos e irá investigar o efeito do exercício físico associado ao tabagismo na expressão deste transportador. Serão utilizados 40 ratos machos Wistar, com peso corpóreo entre 200-250 g, divididos em 4 grupos: (G1)animais expostosà fumaça de cigarro e exercitados; (G2) animais expostos à fumaça de cigarro e sedentarios (G3)não expostos à fumaça do cigarro e exercitados (G4) não expostos à fumaça de cigarro e sedentários. O protocolo de exposição à fumaça de cigarro compreenderá duas fases: adaptação e experimental. Na fase de adaptação, os animais dos grupos G1 e G2 serão expostos à fumaça de 2 cigarros por 10 minutos, uma vez ao dia, por 5 dias. A fase experimental consistirá na exposição dos animais dos grupos G1 e G2 à fumaça da combustão de 4 cigarros, durante 30 minutos, duas vezes ao dia, cinco dias por semana, durante 60 dias. Ainda os animais do grupo G1 e do grupo G3 serão submetidos a sessões na esteira, a uma velocidade de 9,75 metros por minuto, cinco dias por semana, com duração de 60 minutos na fase experimental, e adapatação com duração de 5, 15, 30, 45 e 60 minutos de tempo de exercício. Na última semana de vida, os animais serão submetidos a um teste de tolerância à insulina para avaliação do grau de resistência à insulina. Após 60 dias, os animais serão anestesiados para a remoção do músculo esquelético sóleo e coleta de sangue. Em seguida, os tecidos serão submetidos a diferentes centrifugações para separação de fração de membrana plasmática e microssomal. A quantificação do GLUT4 será feita utilizando-se a técnica de Western Blotting - ECL. Para análise dos dados será utilizado o método estatístico descritivo, com os resultados apresentados como média ± EPM. A avaliação estatística dos resultados será feita através da comparação das médias, utilizando o Teste ANOVA, paramétrico, com pós-teste quando necessário (Tukey-Kramer).