Caracterização funcional do ncRNA intrônico PPP3CB super-expresso em metástases de tumores pancreáticos utilizando ensaios de apoptose.

Resumo

Aproximadamente 90% dogenoma humano é transcrito em RNAs que não codificam para proteínas. Alguns desses RNAs não codificadores (ncRNA) possuem funções bem estabelecidas no metabolismo celular, como o rRNA, tRNA, etc. Diversos trabalhos recentes sugerem que a geração de ncRNAs tenha um papel funcional como modulador da regulação da expressão gênica, não sendo apenas um ruído transcricional. Embora tenha ocorrido um grande avanço nas pesquisas relacionadas com ncRNAs, as funções da maior parte dos diversos tipos desses RNAs produzidos em células humanas permanecem, ainda, desconhecidas . Como esses ncRNA possuem papéis funcionais importantes e muitas vezes possuem sua expressão modificada no desenvolvimento do câncer é possível que eles sejam uma nova perspectiva nos estudos sobre essa doença). O câncer de pâncreas é considerados um dos mais agressivos e possui uma elevada taxa de mortalidade devido à falta de um diagnóstico precoce e à limitação da resposta aos tratamentos disponíveis. Esses dados mostram a necessidade estudar os mecanismos moleculares envolvidos na transformação maligna do tumor de pâncreas, uma vez que o desenvolvimento e a progressão do câncer são acompanhados por uma complexa alteração do padrão de expressão gênica. Uma característica muito importante da célula tumoral metastática é a resistência observada em relação aos processos celulares apoptóticos. Embora tenha sido observado um grande avanço nas pesquisas envolvendo processos celulares apoptóticos e o câncer de pâncreas, não existem ainda estudos envolvendo a regulação por RNAs intrônicos longos não codificadores.O presente estudo visa analisar funcionalmente um ncRNA expresso no intron do gene PPP3CB em relação ao seu potencial apoptótico em uma linhagem de tumor de pâncreas. Esse ncRNA foi identificado em nosso grupo por estar super-expresso em biópsias de metastases de tumores pâncreáticos em relação a tumores primários. Como as metástases de tumores pacncreáticos são mais resistentes à apoptose a hipótese nula do presente projeto é que a expressão de PPP3CB esteja associado à resistência a apoptose. Utilizando uma linhagem derivada de tumor de pâncreas (Mia PaCa-2, serão realizados i) ensaios de super-expressão (simulando o aumento de expressão que se observa na situação metastática) e ii) ensaios de silenciamento deste transcrito seguidos de indução à apoptose a fim de verificar alterações na morte celular associadas a expressão deste ncRNA.