Expressão, purificação e ensaios de cristalização dos domínios de ligação ao ligante dos receptores nucleares PPAR-alfa e PPAR-gamma

Resumo

Os receptores nucleares são uma superfamília de proteínas localizadas no núcleo celular, responsáveis pela regulação de programas genéticos através da mediação de sinalizadores específicos. Esses receptores são responsáveis pela regulação de diversos aspectos fisiológicos do organismo, tais como a embriogênese, a homeostase, a reprodução, assim como o desenvolvimento e morte celular. Por estarem diretamente envolvidos com a expressão gênica, esses receptores vem sendo alvo de vários estudos com o objetivo de entender sua estrutura e sua ação no organismo, facilitando assim a produção de fármacos mais eficientes e com maiores valores terapêuticos. A resolução de estruturas cristalográfica do domínio de ligação ao ligante (LBD) dos receptores nucleares também tem auxiliado muito na definição das bases estruturais para o conhecimento das funções destes receptores. Os Receptores Ativadores da Proliferação de Peroxissomos (PPAR), pertencentes a esta família de receptores nucleares, possuem um importante papel no controle de diversos processos biológicos relacionados, principalmente, ao metabolismo lipídico e a processos inflamatórios. Esses receptores possuem a capacidade de se ligarem a compostos sintéticos e naturais, tornando o conhecimento dos seus mecanismos moleculares algo muito importante no desenvolvimento e na utilização de fármacos para o tratamento de distúrbios metabólicos como obesidade, diabetes do tipo II, dislipidemia, astereoesclerose, inflamação e diversos tipos de câncer.O objetivo deste trabalho é expressar e purificar o domínio de ligação ao ligante do receptor de dois subtipos do receptor PPAR, e desta forma estabelecer as condições para se conduzir estudos estruturais destes receptores. Os resultados destas análises serão relacionados para que haja um melhor entendimento do funcionamento destes receptores, promovendo conceitos básicos para futuras pesquisas nesta área, a qual possua vínculos diretos com o desenvolvimento de fármacos mais eficientes. Este estudo do receptor PPAR vem a acrescentar conhecimentos na linha de pesquisa de outros receptores nucleares (TR, ER, MR, NGFI-B) estabelecida no nosso grupo e apoiada pelo projeto Temático da FAPESP No. 2006/00182-8.