Avaliação microscópica e molecular de novo biomaterial protetor pulpar em dentes submetidos à pulpotomia, em ratos

Resumo

Estratégias terapêuticas que preservam a polpa dentária são as melhores escolhas no tratamento de dentes vitais com lesões de cárie profundas ou exposições pulpares, conhecidas por terapia pulpar vital (TPV). Os materiais utilizados na TVD devem manter a vitalidade pulpar e promover a diferenciação de células-tronco da polpa em células odontoblásticas, favorecendo a formação de dentina reparadora ou tecido mineralizado. Assim, o objetivo desse estudo será a avaliação microscópica e molecular do uso de um biomaterial composto por uma membrana de Gelfoam® embebida no peptídeo CAP-p5, como material protetor pulpar durante a pulpotomia, em molares de ratos. Noventa e seis animais serão divididos em quatro grupos (24 animais/grupo), conforme segue: Grupo I: exposição pulpar coberta por guta-percha; Grupo II: exposição pulpar e pasta de hidróxido de cálcio P.A. sobre a polpa + cimento de hidróxido de cálcio; Grupo III: exposição pulpar e membrana de Gelfoam® sobre a polpa; e Grupo IV: exposição pulpar e membrana de Gelfoam® associada ao peptídeo CAP-p5 sobre a polpa. Todos os grupos terão três subgrupos, com 08 animais cada, diferenciando-se em subgrupos A: período de 7 dias; subgrupos B: período de 30 dias; subgrupos C: período de 60 dias. Os dentes de todos os animais serão selados com ionômero de vidro restaurador autopolimerizável. Após os períodos de 7, 30 e 60 dias os animais serão eutanasiados e as maxilas e mandíbulas serão processadas para análise microscópica e molecular. As lâminas serão coradas em hematoxilina e eosina (HE) e analisadas em microscopia óptica para análise descritiva das características da câmara pulpar e possível formação de ponte de dentina, além do tecido pulpar radicular e regiões apical e periapical. Ainda, análise descritiva e quantitativa da possível ponte de dentina formada com o microscópio em modo fluorescente. Avaliação histomicrobiológica para presença e localização de bactérias e concentração/intensidade bacteriana, através da coloração de Brown e Brenn modificada. Para analisar a presença de cálcio, será realizada a coloração de Von Kossa. Será realizado, também, o ensaio de imunofluorescência para os marcadores de CD73, CD90 e CD105, para detectar células-tronco mesenquimais no tecido pulpar. A análise de RT-qPCR será realizada para os marcadores de proteína da matriz dentinária 1 (DMP-1) e sialofosfoproteína dentinária (DSPP). Os resultados obtidos serão submetidos à análise estatística por meio de testes apropriados de acordo com a natureza dos dados. Para todas as análises será adotado o nível de significância de 5%.