Avaliação do papel e dos mecanismos de ação da IL-6 na diferenciação osteo/cementogênica de células do ligamento periodontal de humanos

Resumo

O presente estudo tem como objetivo investigar se o tratamento de células do ligamento periodontal que apresentam baixo potencial para diferenciação osteo/cementogênica (células LOP-hPDL) com a proteína recombinante humana da IL-6 (rhIL-6) poderia potencializar a capacidade de maturação destas células nesse fenótipo. Serão estabelecidas culturas primárias de dez populações de hPDL. A partir do ensaio de Vermelho de Alizarina (AR-S), essas populações serão caracterizadas como células que apresentam alto potencial para diferenciação osteo/cementogênica (HOP-hPDL) e baixo potencial (LOP-hPDL). Três populações HOP-hPDL e três LOP-hPDL serão selecionadas com base na quantificação da AR-S e do nível de transcritos e/ou proteína para os receptores da IL-6 (IL-6R e gp130), determinado pela técnica do qRT-PCR e Western Blot. Essas células serão cultivadas nas seguintes condições, de acordo com os grupos experimentais: Grupo Controle ( C): células HOP e LOP-hPDL cultivadas em meio de cultura padrão (DMEM + 10% FBS + 1% antibiótico); Grupo OM (OM): células HOP e LOP-hPDL cultivadas em meio osteogênico, Grupo anti-IL-6 + OM (anti-IL-6): células HOP-hPDL cultivadas em meio osteogênico associado com o anticorpo anti-IL-6 para bloquear o IL-6R; Grupo rhIL-6 + OM (rhIL-6): células LOP-hPDL cultivadas em meio osteogênico associado com a proteína recombinante humana da IL-6. Para avaliar o papel da IL-6 no processo de diferenciação osteo/cementogênico serão conduzidos os seguintes ensaios: 1) formação de matriz mineralizada in vitro (ensaio de AR-S e von Kossa) após 21 dias em cultura, 2) atividade de fosfatase alcalina (ALP) após 3, 7 e 14 dias e 3) expressão dos genes osteogênicos. A fim de definir a via de sinalização da IL-6 nas células HOP e LOP-hPDL, será analisada a expressão dos genes e proteínas relacionados com a via STAT3 e Wnt.