Papel dos macrófagos na determinação do microambiente hepático e progressão da esteato-hepatite (NASH) para carcinoma hepatocelular (HCC)

Resumo

Aproximadamente 80-90% dos casos primários de hepatocarcinoma (HC) ocorrem como uma progressão da esteato-hepatite (NASH), nomeadamente, em fígados que apresentam inflamação crónica. Neste estudo, abordaremos como a inflamação crônica do fígado modula o microambiente favorecendo a evasão imunológica e a progressão da NASH para HC, com foco especial no papel das células de Kupffer residentes no fígado e dos macrófagos recrutados como principais determinantes desses processos. Para isso, empregaremos dois modelos de camundongos que apresentam progressão bem definida de NASH para HC, a saber: 1- camundongos com deleção de Pten em hepatócitos, que apresentam uma progressão de NASH para HC independente da dieta devido ao aumento da síntese lipídica dos hepatócitos; e 2- camundongos com deleção Raptor em hepatócitos que desenvolvem tumores hepáticos quando alimentados com dieta rica em gordura e tratados com o carcinógeno CCL4. Em um primeiro protocolo, esses camundongos serão eutanasiados em NASH ou HC para caracterização de leucócitos residentes no fígado (células de Kupffer e macrófagos infiltrados, neutrófilos, linfócitos etc.) por FACs e RNASeq, deposição lipídica e estágio fibrótico, perfil de citocinas e quimiocinas, metabólito perfil, sinalização inflamatória através das vias TLR4, inflamassoma NLRP3, MAPK e PI3K-mTOR, metabolismo de lipídios e glicose, função mitocondrial, estresse oxidativo e danos ao DNA. Em um segundo protocolo, ambos os modelos de camundongos serão avaliados quanto aos mesmos parâmetros detalhados no protocolo 1 após a depleção de macrófagos com clodronato 4 semanas antes dos tempos de NASH ou HC para investigar o papel dos macrófagos residentes e infiltrados no desenvolvimento de NASH e HC. Ao fazer isso, esperamos obter mais informações sobre os aspectos inflamatórios críticos que tornam o microambiente hepático propenso à evasão imunológica e à progressão da NASH para HC. Tal conhecimento poderia contribuir significativamente para o desenvolvimento de novas estratégias para prevenir e tratar o HC. (AU)