Caracterização funcional de Rad1 em Leishmania, uma subunidade do complexo de checkpoint 9-1-1

Resumo

A leishmaniose é uma parasitose de importância médica indiscutível e seu agente etiológico possui mecanismos de adaptação frequentemente associado à plasticidade genômica, como, por exemplo, a variação do número de cópias de cromossomos e genes. Estes mecanismos podem estar atrelados a situações de estresse da replicação do DNA e à ativação de vias de reparo de danos ao DNA. Nosso laboratório estuda fatores de Leishmania envolvidos na resposta ao estresse replicativo, como por exemplo, o complexo Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1), que atua nos passos iniciais da resposta e regula a progressão do ciclo celular. As subunidades Rad9 e Hus1 foram estudadas mais detalhadamente. No entanto, a caracterização da subunidade Rad1 é ainda bastante limitada. Em mamíferos, a depleção de Rad1 está associada a anomalias cromossômicas e sugere-se que Rad1 tenha um papel independente em células meióticas, indicando uma gama mais ampla de funções desta proteína na estabilidade do genoma. Esta proposta tem como objetivo caracterizar a expressão e função de Rad1 em Leishmania, utilizando linhagens modificadas por edição de genoma pelo sistema CRISPR/Cas9, a fim de explorar a localização subcelular de Rad1 e analisar os efeitos de sua deleção. Para isso, estudaremos a sinalização de resposta ao estresse replicativo, o acúmulo de fitas simples e quebras de dupla fita de DNA, a amplificação de elementos extracromossomais e a variação do número de cópias de genes e cromossomos em linhagens deficientes ou nulas para Rad1. Compreender esses mecanismos é crucial para elucidar aspectos importantes da biologia de Leishmanias e pode abrir caminho para o desenvolvimento de novas estratégias para controlar este patógeno negligenciado.