Edição gênica de DLK1 por CRISPR/Cas9 em linhagens celulares derivadas de carcinoma medular e diferenciado de tireoide humana

Resumo

O carcinoma medular da tireoide (MTC) é um tipo raro de câncer de tireoide, podendo ser esporádico ou hereditário. A forma herediária está fortemente associada a variações do gene RET (REarranged During Transfection), que é também o gene candidato para carcinoma papilar de tireóide (PTC). Além de mutações que promovem variabilidade clínica, as alterações no número de cópias (CNAs, do inglês "copy number alterations") estão relacionadas à progressão do câncer. Identificamos que o aumento de cópias somáticas do gene DLK1, com consequente aumento da sua expressão, está associado a um maior tamanho de tumor. Este projeto tem como objetivo realizar, através da aplicação do sistema CRISPR/Cas9, o knockout do gene DLK1 em duas linhagens celulares derivadas de MTC (TT e MZ-CRC-1). Como primeira etapa, confirmaremos a expressão de de DLK1 nas linhagens de MTC, por western blot. Uma vez confirmada a expressão do gene DLK1, avaliamos o número de cópias do gene DLK1 nas linhagens, para definir a eficiência do knockout. Após esta etapa, realizaremos o knockout do gene DLK1 nas linhagens de MTC. Por fim, avaliaremos a eficiência do knockout de DLK1 nas duas linhagens de MTC. Este modelo de knockout nas linhagens celulares de MTC permitirá investigar, em projetos futuros, o efeito direto da inativação do gene DLK1 na gênese e/ou progressão do MTC.