Análise dos efeitos dos genes spxB, swan e nox de Streptococcus sanguinis na produção de NETs por neutrófilos humanos

Resumo

Streptococcus sanguinis é uma espécie comensal abundante da cavidade bucal, capaz de iniciar a formação de biofilmes dentários. Bactérias desta espécie estão comumente envolvidas em casos de endocardite infecciosa (EI) em indivíduos susceptíveis, sendo também detectadas em placas ateromatosas. Streptococcus sanguinis expressa três genes, spxB, swan e nox, potencialmente envolvidos na citotoxidade e/ou modulação da NETose em neutrófilos (PMN), principais leucócitos da imunidade inata nos tecidos periodontais e corrente sanguínea. Estes genes foram previamente reportados como requeridos respectivamente para a produção de H2O2, degradação de DNA e para a reposta ao estresse oxidativo. Dados do nosso grupo indicam que estes genes codificam proteínas multifuncionais capazes de interagir com proteínas séricas e/ou da matriz extracelular (MEC). O objetivo deste projeto é investigar a influência de spxB, swan e nox na produção de NETs por PMN humanos expostos a S. sanguinis na presença ou ausência de componentes séricos. Para isto, cepas mutantes isogênicas de cada um destes genes serão comparadas com a cepa parental S. sanguinis SK36 quanto à capacidade de ligação a glicoproteínas da MEC/plasma (fibronectina, fibrinogênio, plasminogênio, colágeno tipo I) em ensaios fluorimétricos. A capacidade das cepas de induzir NETose em PMN isolados de sangue periférico humano na presença de 20% de soro humano (SH), 20% de soro humano inativado pelo calor (SHI) ou PBS será avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Além disso, as frequências de indução de NETose por todas as cepas serão quantificadas após a incubação destas em sangue humano por diferentes tempos, seguida de análises de microscopia de luz dos PMN identificados em esfregaços de sangue corados com May-Grunwald-Giemsa. Análises semelhantes serão realizadas com PMN previamente isolados e desafiados com as cepas estudadas na presença de 20% de SH, SHI ou PBS. Os resultados deste projeto deverão revelar mecanismos através dos quais S. sanguinis pode induzir NETose por PMN, um processo chave não somente para eliminação de microrganismos por PMN, mas também envolvido na patogenia de doenças cardiovasculares.