Expressão heteróloga da enzima lacase de H. tenuis

Resumo

Atualmente, há uma demanda de fontes alternativas que reduzam e/ou controlem os efeitos do amplo nível de poluição no mundo. O etanol de segunda geração, é um biocombustível que pode ser produzido por meio do processo de hidrólise dos polissacarídeos, utilizando a biomassa lignocelulósica com a adição de complexos enzimáticos. Para a conversão da biomassa lignocelulósica em etanol, esse material deve passar pelo processo de hidrólise para que ocorra a conversão deste material em açúcares fermentescíveis. No entanto, as enzimas atualmente utilizadas possuem um custo elevado, sendo um limitante para esse processo. Nesse sentido, a busca de enzimas que possam otimizar o processo de produção do etanol de segunda geração é de suma importância. A lignina é um polissacarídeo constituinte da biomassa que também pode ser aplicado na produção de fontes de energia. Sua aplicação é pouco explorada e pouco utilizada comercialmente uma vez que esse composto é bastante resistente a hidrolise enzimática e química devido a sua ligação cruzada com a celulose e com outros constituintes da parede celular. As lacases são um grupo de enzimas ligninolíticas muito utilizadas nesta finalidade e por isso tem sido alvo de diversos estudos biotecnológicos nos últimos anos. Vem sendo empregadas em diferentes setores industriais desde a empresa de roupas até a indústria de sucos. Além disso, são enzimas encontradas em diversos organismos, desde plantas a insetos. Entre os insetos, os cupins são reconhecidos por apresentarem uma alta capacidade na digestão de lignocelulose. Assim, esse projeto tem o objetivo promover a clonagem e a expressão heteróloga em Pichia pastoris de uma lacase identificada na espécie de cupim H. tenuis para o possível uso na produção de etanol de segunda geração. Como resultado do projeto é esperado além de sua produção, a realização de testes visando estabelecer a atividade enzimática, estabelecendo pH e a temperatura ideal para que essa enzima possa ser posteriormente purificada e utilizada na confecção de coquetéis enzimáticos para a produção de etanol de segunda geração.