Desenvolvimento e Validação de Modelo de Tecido Pulmonar Humano (3D) para Estudo da Interação Patógeno-Hospedeiro de Biofilme de Histoplasma capsulatum

Resumo

A histoplasmose, uma Infecção Fúngica Invasiva (IFI), é ocasionada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum que possui ampla distribuição mundial. Trata-se da quarta IFI com maior número de casos anuais, atingindo mais de 600 mil pessoas todos os anos. Nas duas últimas décadas as IFIs têm aumentado no mundo inteiro e o número de pacientes em risco tem crescido drasticamente. Recentemente, foi estabelecida uma correlação entre o modo de infecção de H. capsulatum e a formação de biofilmes, caracterizados por serem aglomerados celulares complexos, onde há produção de uma matriz extracelular que por si só confere proteção ao ambiente externo, que induzem, entre outros, a resistência antifúngica. A interação patógeno-hospedeiro de biofilmes de H. capsulatum é essencial para o estabelecimento da doença e necessita de estudos com modelos videdignos ao observado em humanos. Dessa maneira, esse projeto de pesquisa tem como objetivo o desenvolvimento e a validação de um modelo tridimensional de tecido pulmonar humano para estudo da interação patógeno-hospedeiro de biofilme de H. capsulatum, para futuramente caracterizar os mecanismos de virulência envolvidos na infecção. Esse modelo se aproxima mais do real do que metodologia de animais mamíferos in vivo, contribuindo para a pesquisas mais rápidas em larga escala, para futuramente avaliar a interação patógeno-hospedeiro de biofilme de Histoplasma capsulatum. Para isso, iremos desenvolver um tecido pulmonar humano funcional composto pelo tricultivo de células hSAEC diferenciadas por ALI, células MRC-5 e THP-1 macrófago-like para a construção de tecido estratificado in vitro com a finalidade de avaliar a infecção por células planctônicas e biofilmes de H. capsulatum. A validação do modelo tridimensional será realizada por High-Speed Video Microscopy Analisys (HSVA) para visualização do batimento dos cílios e a análise da diferenciação das células hSAEC por qRT- PCR de genes característicos de cada subtipo celular. Além disso, será realizada a padronização da infecção do modelo por biofilmes de H. capsulatum através da quantificação da expressão de genes diferencialmente expressos já caracterizados pelo nosso grupo tanto pelo fungo quanto pelas células hospedeiras.