Avaliação da resposta de pulgas Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) (Siphonaptera: Pulicidae) frente à infecção por Bartonella henselae por meio de análises transcriptômicas e de microbioma

Resumo

Pulgas Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835) são ectoparasitos importantes de cães e gatos em todo o mundo e vetores competentes para espécies zoonóticas de Bartonella (B. henselae, B. clarridgeiae, B. koehlerae) e Rickettsia (R. typhi e R. felis). Bartonella henselae é a espécie do gênero Bartonella mais patogênica para os seres humanos e é o principal agente etiológico da Doença da Arranhadura do Gato (DAG). A prevenção da transmissão de B. henselae baseia-se atualmente no controle da infestação de gatos por pulgas por meio de uso de ectoparasiticidas, para os quais vem se observando eficácia reduzida e resistência. Alternativas "environmental friendly", tais como a vacinação tanto contra a infestação de pulgas quanto para o bloqueio da transmissão de B. henselae por sifonápteros, vêm ganhando destaque. Entretanto, a compreensão da interação entre B. henselae e o intestino de pulgas ainda é limitada. O presente estudo tem como objetivos investigar a interação entre B. henselae e o trato digestório da pulga C. felis por meio de abordagens "-OMICS", a fim de identificar a expressão de genes do intestino de pulgas frente à infecção por B. henselae por meio de análises de transcriptoma, bem como a possível alteração da comunidade microbiana do intestino de pulgas quando infectadas pelo referido patógeno. Para tal, seis gatos domésticos serão infectados experimentalmente com B. henselae (amostra Jaboticabal) e dois gatos inoculados com solução salina esterilizada. Uma vez atingido o pico de bacteremia, os animais serão infestados com pulgas C. felis que se alimentarão por 24 horas ou nove dias. Posteriormente, as pulgas serão removidas, seus intestinos dissecados e submetidos à extração de DNA e RNA para a análises transcriptômica e de microbioma do intestino das pulgas. Amostras de DNA extraídas das pulgas serão submetidas à amplificação da região V4-V6 do gene 16S rRNA e as bibliotecas construídas ao sequenciamento via Illumina. Amostras de RNA extraídas do intestino das pulgas serão submetidas à técnica de RNA-Seq e os resultados da análise transcriptômica validados por RT-qPCR. Cinco tratamentos serão propostos às análises de transcriptômica e microbioma: pulgas não alimentadas; alimentadas por 24 horas em gatos negativos para B. henselae; alimentadas por nove dias em gatos negativos para B. henselae; alimentadas por 24 horas em gatos infectados experimentalmente com B. henselae; e alimentadas por nove dias em gatos infectados experimentalmente com B. henselae. O presente estudo possibilitará a identificação de genes relacionados ao intestino de C. felis superexpressos frente à infecção por B. henselae, bem como trará informações a respeito das alterações do microbioma de intestino de pulgas frente à infecção por B. henselae. O resultados obtidos abrirão portas para futuros estudos de desenvolvimento de vacinas tanto para controlar a infestação por pulgas C. felis quanto visando o bloqueio de transmissão de B. henselae. (AU)