Identificação, caracterização e produção de células-tronco derivadas de membrana amniótica para aplicação em doenças de superfície ocular

Resumo

As doenças de superfície ocular (DSO) em suas formas mais graves, como olho seco, queimaduras químicas, deficiência de células limbares e doença neurotrófica, ainda possuem grandes desafios de tratamento. Na busca pela medicina regenerativa e de precisão, diversos tipos celulares e fontes tem sido descobertas, analisadas e usadas em estudos experimentais, pré-clínicos e clínicos, como as células-tronco (CT) adultas. Essa população celular tem se mostrado promissora devido à sua capacidade de indiferenciação, clonogenicidade, auto-renovação e potencial de diferenciação, além de características imunomoduladoras e pró-angiogênicas. Uma fonte celular interessante, no qual o tecido por si só já é amplamente utilizado em curativos oftalmológicos, é a membrana amniótica (MA). As CT-MAs são consideradas uma fonte segura, efetiva, tecnicamente fáceis de serem coletadas, isoladas e amplificadas para uso em terapia celular oftalmológica, porém esses processos ainda não foram padronizados. Assim, o presente projeto se dedica a padronização dos processos de coleta, isolamento, cultivo, caracterização e criopreservação de CT-MA em condições GMP (Good Manufacturing Practices) para que possam ser utilizadas em futuros estudos pré-clínicos e clínicos. Para isso, amostras de MA serão coletadas a partir de 10 placentas humanas. Serão testados e validados diferentes protocolos de processamento (digestão enzimática, dissociação mecânica, explante das células), além da investigação das taxas de duplicação celular, ciclo celular, senescência celular e estabilidade genética. Ainda, serão realizadas análises morfológicas através de microscopia e imunocitoquímica, análise imunofenotípica por citometria de fluxo, checagem do Potencial de Diferenciação Tri linhagem (osteogênica, adipogênica e condrogênica), extração de RNA para análise de RT-PCR. As respectivas análises estatísticas serão realizadas considerando cada variável (dados paramétricos, não-paramétricos ou multifatoriais). Ainda, alíquotas serão armazenadas a cada passagem para compor um biobanco dessas células. Em cada etapa será feito um controle rigoroso para garantir a qualidade dos processos, desde a checagem de todos os exames microbiológicos e sorológicos de cada paciente que doará a MA, bem como o controle microbiológico para cultivo celular. Nossa hipótese é que as CT-MA podem para atuar regenerando a superfície ocular e serem utilizadas na terapia celular de DSO. Esperamos que com a aplicação deste desenho experimental, seja possível a obtenção de um banco de CT-MA humanas em condições para aplicações clínicas.