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Associação do fitoestrógeno Vitex agnus-castus e do meio condicionado de macrófagos polarizados em M1 em modelos in vivo e in vitro para estudo do metabolismo ósseo de ratas ovarietomizadas.

Processo: 22/13865-9
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de junho de 2023
Vigência (Término): 31 de maio de 2025
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia
Pesquisador responsável:Karina Fittipaldi Bombonato Prado
Beneficiário:Sayuri Poli Suguimoto
Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Macrófagos   Osteoblastos   Osteoporose   Osso e ossos   Vitex agnus-castus
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:fitoestrógeno | Macrófagos | osteoblastos | osteoporose | tecido ósseo | vitex agnus-castus | HIstologia e Cultura de Células

Resumo

Dados recentes sugerem que a polarização dos macrófagos em pro-inflamatórios (M1) e anti-inflamatórios (M2) pode contribuir para a diferenciação osteoblástica e modulação da osteogênese em defeitos ósseos críticos na presença de condições sistêmicas como a osteoporose, onde a inflamação crônica é um fator relevante. O uso de substâncias naturais antioxidantes e anti-inflamatórias em alternativa à reposição hormonal e medicamentos utilizados poderiam amenizar efeito colaterais e atrasos na neoformação óssea, comumente relatados pelos indivíduos acometidos pela osteoporose, principalmente mulheres na pós-menopausa. Sendo assim, o objetivo do presente projeto será avaliar o reparo ósseo da calvária e a atividade funcional osteoblástica na presença de meio condicionado de macrófagos polarizados em M1 associado com o extrato do fitoestrógeno e anti-inflamatório Vitex ag-nus-castus, utilizando ratas submetidas ao processo de ovariectomia. Para os experimentos in vivo, ratas Wistar Hannover serão ovariectomizadas e receberão defeitos ósseos na calvária de 5mm de diâmetro. Imediatamente após a cirurgia, será administrado o extrato de Vitex agnus-castus por gavagem, a cada 2 dias, durante 90 dias, até a eutanásia, juntamente com a aplicação do meio condicionado de macrófagos em M1 aplicado na região do defeito, 1 vez por semana, também durante 90 dias, até a eutanásia. As ratas serão divididas em 10 grupos: 1 - SHAM e 2 - OVX (administração de água), 3 - SHAMmc e 4- OVXmc (administração de água + inoculação de meio condicionado de macrófagos), 5 - SHAMvx e 6 - OVXvx (administração de Vitex agnus-castus), 7 - SHAMvx/ad e 8 - OVXvx/ad (administração de Vitex agnus-castus + inoculação de água destilada), 9 - SHAMvx/mc e 10 - OVXvx/mc (administração de Vitex agnus-castus + inoculação de meio condicionado de macrófagos). Após isso, as amostras da calvária serão coletadas para processamento histológico e as amostras dos fêmures serão coletadas para isolamento de células da medula óssea. A análise histológica qualitativa das pranchas histológicas será realizada com imagens em HE. Já a análise histológica quantitativa do trabeculado ósseo neoformado será realizado por meio de software Image J. A cultura de células mesenquimais da medula óssea obtida a partir dos fêmures dos grupos citados será realizada em garrafas em meio de cultura osteogênico até a subconfluência e plaqueadas em uma concentração de 2 x 104 células por poço em placas de cultura (n=5). Os grupos experimentais serão divididos em: 1 - Células osteoblásticas + meio osteogênico, 2 - Células osteoblásticas + meio condicionado de macrófagos, 3 - Células osteoblásticas + Vitex agnus-castus e 4 - Células osteoblásticas + meio condicionado de macrófagos + Vitex agnus-castus. Após os tempos experimentais, serão avaliados os seguintes parâmetros: proliferação celular, detecção in situ de ALP e detecção e quantificação de matriz mineralizada. Os dados obtidos serão analisados por programas estatísticos adequados para p<0.05

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