Expressão em macrófagos de receptor antigênico quimérico (CAR) específico para Cryptococcus spp para subverter mecanismos de escape do fungo

Resumo

As infecções fúngicas acometem milhões de humanos a cada ano, e a criptococose apresenta importante relevância ao afetar indivíduos imunocomprometidos e indivíduos saudáveis. A criptococose representa uma das principais causas de morbidade e mortalidade mundial, principalmente, entre os indivíduos HIV+. O avanço no desenvolvimento de novas drogas antifúngicas para o combate da criptococose humana está deficitário ao considerar a capacidade do gênero Cryptococcus em adquirir resistência diante do tratamento de escolha disponível até o momento. Esse fator é agravado pelos eficientes mecanismos de evasão da resposta imunitária do hospedeiro desenvolvido pelo Cryptococcus spp., com destaque para a subversão da atividade fagocítica e fungicida de células da imunidade inata como os macrófagos. Diante disso, a atual proposta visa bioengenheirar macrófagos alveolares via receptor antigênico quimérico (CAR) para promover o reconhecimento direto de leveduras de Cryptococcus spp. e, de forma concomitante, induzir uma ativação celular caracterizada por elevada atividade fungicida. Essas duas abordagens contarão com o envolvimento do construto GXMR-CAR, um CAR com porção de reconhecimento específico para GXM presente na cápsula de Cryptococcus spp. O construto GXMR-CAR será modificado para conter as porções hinge/transmembrana e domínio de transdução de sinal oriundos do receptor Dectina-1 (GXMR-Dectin-1-CAR-M) ou do receptor Fc³RI (GXMR- Fc³RI -CAR-M). Esses novos construtos de GXMR-CAR terão suas sequências codificadoras clonadas em vetor lentiviral que permitirá a produção de partículas lentivirais a serem utilizadas na modificação de macrófagos alveolares das linhagens AMJ2-C11 e MH-S. Essas células modificadas terão sua capacidade fagocítica avaliada na presença de Cryptococcus spp., como forma de mensurar os efeitos dos novos construtos de GXMR-CAR no redirecionamento de macrófagos frente ao fungo. Em continuidade, a capacidade dos construtos de GXMR-CAR, através da via de sinalização desencadeada pelo receptor dectina-1 e FcgR, em induzir uma ativação de Syk terá alta relevância no processo de maturação fagossomal e consequente formação do fagolisossomo após o engolfamento do fungo. Esse processo é fortemente dependente do papel de Syk, e o Cryptococcus spp. subverte drasticamente o processo de maturação fagossomal. A presente proposta também propõe uma forma sofisticada de associar a ativação de Syk, via os construtos de GXMR-CAR, e a up-regulação da molécula Syk de forma condicionada pelo reconhecimento de Cryptococcus spp. Essa expressão regulada de Syk ocorrerá via um CAR de quinta geração, denominado receptor SynNotch, que conterá o domínio de ligação ao GXM de Cryptococcus spp. Portanto, a atual proposta busca bioengenheirar macrófagos alveolares com distintos CAR que promovam o reconhecimento de Cryptococcus spp. e atue na expressão e ativação de Syk que é uma molécula chave no desencadeamento da atividade fagocítica e fungicida contra a infecção por Cryptococcus spp. O desenvolvimento dessa estratégia terapêutica apresenta caráter inovador e dê elevada importância em estudos clínicos no contexto da criptococose.