Nocaute do TRPM2 e seus impactos em um modelo animal da doença de Parkinson

Resumo

A doença de Parkinson (DP) é uma doença devastadora. A DP é clinicamente diagnosticada por disfunções motoras e afeta milhões de pessoas em todo o mundo. Entre as características neuropatológicas estão a degeneração de neurônios dopaminérgicos na substância negra pars compacta e a perda de dopamina em sua área de projeção, o estriado. Atualmente não há cura para a DP, por isso muitos pesquisadores buscam desenvolver novos alvos terapêuticos. O Receptor de Potencial Transiente de Melastatina 2 (TRPM2) é um canal de cálcio expresso em diferentes tipos de células, incluindo neurônios e células gliais. Ativado pelo estresse oxidativo, o canal parece ser um dos mecanismos envolvidos na morte celular. O potencial envolcimento do TRPM2 em doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Alzheimer e isquemia, já foi descrito. No entanto, mais estudos são necessários para alcançar uma melhor compreensão do envolvimento do TRPM2 na DP. Assim, os objetivos deste projeto são (i) avaliar o efeito da inibição de TRPM2 em um modelo animal de DP usando camundongo geneticamente modificado para TRPM2 e (ii) verificar o efeito da inibição seletiva de TRPM2 em células microgliais e neuronais em um modelo in vitro da DP. A abordagem in vivo envolve camundongos knockout para TRPM2 que serão submetidos à cirurgia estereotáxica para injeção de 6-hidroxidopamina (6-OHDA) no estriado direito. Nos dias 7, 14 e 21 após a cirurgia os animais serão submetidos a testes de comportamento motor. No dia 21, os encéfalos serão coletados para ensaios imuno-histoquímicos. Para a abordagem in vitro, será estabelecida uma cocultura entre neurônios do tipo selvagem e micróglia nocaute para TRPM2, e vice-versa. As culturas serão tratadas com 6-OHDA e serão avaliadas viabilidade celular, morte celular, cálcio intracelular, imuno-histoquímica e níveis de citocinas. Os resultados irão destacar o envolvimento do TRPM2 na DP, o que pode ser importante para o estabelecimento deste canal como novo alvo farmacológico para a DP. (AU)