Transfecção de vesículas extracelulares do fluido folicular com microRNAs específicos: uma forma de miRNA delivery para células do complexo cumulus-oócito de bovinos

Resumo

Biotécnias reprodutivas como a produção in vitro de embriões aceleram o melhoramento genético, porém o sucesso da mesma está diretamente ligado com a capacidade de mimetizar o ambiente in vivo. Dentre os eventos que ocorrem durante a maturação folicular e crescimento oocitário está a comunicação intercelular no ambiente folicular e consequentemente a transferência de biomoléculas entre as células somáticas e entre as células somática e gaméticas. A transferência dessas moléculas é facilitada pelo fluido folicular presente no antro folicular. O fluido folicular fornece um importante microambiente para o crescimento folicular e maturação do oócito, uma vez que contêm, dentre outros componentes, vesículas extracelulares (EVs). EVs são nanopartículas que contêm diversas moléculas biológicas, tais como o microRNAs, que podem modular a função das células receptoras. Portanto, a hipótese do presente estudo é que vesículas extracelulares do fluido folicular podem ser carregadas com miRNAs específicos e são capazes de entregar esses miRNAs para as células do cúmulus in vitro. Dessa forma, os objetivos são 1) isolar e transfectar vesículas extracelulares do fluido folicular com miRNAs, 2) verificar a eficiência de transfecção dos miRNAs, 3) determinar a eficiência de entrega de miRNAs, 4) determinar os efeitos moleculares da suplementação de CCOs bovinos com vesículas extracelulares contendo miRNAs de interesse e 5) avaliar as taxas de maturação e produção de embriões de CCOs suplementados com vesículas extracelulares contendo miRNAs de interesse. Esperamos demonstrar o sucesso da transfecção de vesículas extracelulares com miRNAs específicos assim como a sua entrega para as células do cumulus. Os resultados do nosso estudo são de fundamental importância para preencher lacunas da biologia reprodutiva, da mesma maneira que se apresenta como uma potencial ferramenta para incrementar as taxas de produção in vitro de embriões.