Estudos da interação patógeno-hospedeiro de biofilmes de Histoplasma capsulatum mediada por Hsp60-CR3 em modelo de tecido pulmonar humano funcional

Resumo

A histoplasmose é uma infecção fúngica pulmonar e sistêmica causada pelo fungo termodimórfico Histoplasma capsulatum que afeta milhares de pessoas anualmente, sendo uma Infecção Fúngica Invasiva (IFI) de grande relevância mundial e que tem avançado em regiões do globo não antes relatada. A Organização Mundial da Saúde recentemente o classificou como de alta prioridade entre os patógenos fúngicos humanos. Diversos mecanismos estão relacionados com o processo de estabelecimento e desenvolvimento da infecção, dentre os fatores importantes para a patogênese da doença destacam-se a adesão celular mediada com Hsp60/CR3 e provavelmente a formação de biofilmes. Biofilmes são comunidades sésseis de microrganismos onde as células se encontram aderidas à uma interface ou substrato envoltos por uma Matriz extracelular (MEC) composta de diversas substâncias poliméricas que contribuem para sua virulência. Pesquisas anteriores do nosso grupo a partir de abordagens ômicas identificaram a expressão diferencial de metabólitos, RNAs e proteínas a partir da análise comparativa de leveduras planctônicas e em biofilmes de H. capsulatum a partir do metabolôma, transcriptôma e proteoma. A análise transcriptôma da infecção ainda revelou a presença da expressão diferencial de miRNAs quando a célula é infectada por biofilmes, trazendo diferentes questões relacionadas à interação patógeno-hospedeiro de H. capsulatum. Nossa hipótese é que a interação patógeno-hospedeiro de biofilmes ocorre diferencialmente nas leveduras de H. capsulatum, sendo os biofilmes capazes de ativar simultaneamente diferentes vias de interação ao mesmo tempo que promovem a rápida fagocitose, não tendo a via Hsp-60/CR3 como a principal, como demonstrado em leveduras. Dessa forma, o objetivo desse projeto é estudar a influência da proteína Hsp60 em biofilmes de H. capsulatum, e seu papel durante a interação biofilme-hospedeiro em modelo tridimensional de tecido pulmonar humano, caracterizando a interação mediada por essa proteína no processo infectivo, a partir do bloqueio da Hsp60 com anticorpo monoclonal mAb (76B) seguido da infecção de tecido pulmonar humano tridimensional in vitro e avaliação a expressão de genes diferencialmente expressos por biofilmes do fungo e genes do hospedeiro importantes na interação patógeno-hospedeiro por RT-qPCR.