Análise da Interação entre Microbioma e Hospedeiro nas alterações Teciduais Epigenéticas e Transcricionais em pacientes com Periodontite Grau C

Resumo

A periodontite Estágio 3-4 Grau C em jovens (Perio4C), é uma doença de progressão rápida desencadeada por um desequilíbrio na resposta imune do hospedeiro à microbiota disbiótica subgengival, podendo esse desequilíbrio estar relacionado à interação dos patógenos periodontais do biofilme com as células do epitélio do sulco gengival e do tecido conjuntivo adjacente, que, por sofrerem modificações epigenéticas, super-expressam ou deixam de expressar genes importantes para a homeostase tecidual. Porém, ainda não se sabe qual o impacto que as modificações epigenéticas representam na etiopatogênese dessa doença, bem como a relação direta entre patógenos específicos e a regulação gênica local. Assim, esse estudo busca avaliar o impacto da colonização disbiótica de indivíduos com Perio4C no padrão de metilação de genes relacionados tanto à adesão celular epitelial quanto à defesa do tecido conjuntivo adjacente, bem como no produto final de secreção de proteínas pelas células desse tecido. Para isso, serão coletadas, do mesmo sítio dental, amostras de fluído crevicular gengival (FCG), biofilme subgengival e tecido gengival, de 20 pacientes com Perio4C e 20 pacientes com saúde periodontal (SP), sendo que para os pacientes com Perio4C as amostras serão coletadas tanto de um sítio saudável (PS < 4mm) quanto de um sítio afetado pela doença, (PS > 7mm). A biópsia de tecido será submetida à microdissecção à laser (LCM) para separação do epitélio e do tecido conjuntivo, e de ambas as estruturas será extraído o DNA e o RNA para avaliação do padrão de metilação dos genes TJP1, PLAK, DESP, CADH1, para o epitélio, e IL10, IL1², IL6, 1L17, TNF±, para o tecido conjuntivo. Do biofilme será extraído o DNA bacteriano e o gene 16S rRNA será utilizado para o sequenciamento das amostras e identificação das espécies a partir da plataforma Illumina MiSeq. A quantificação das citocinas IL-1², IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, TNF-±, INF-³ das amostras de FCG será realizada a partir da tecnologia Luminex/MAGpix. Para os testes estatísticos será utilizado um nível de significância de 5%.