Efeitos da deleção condicional do PGC-1alfa e exercício físico sobre as vias de biogênese mitocondrial, autofagia e rev-erb-alfa no músculo esquelético de camundongos: uma abordagem proteômica

Resumo

O sedentarismo induz uma redução da integridade funcional das mitocôndrias e, consequentemente, o aumento da produção de radicais livres e espécies reativas, os quais podem levar a instauração de doenças crônicas não transmissíveis. Nesse sentido, o fator de transcrição PGC-1alfa é um alvo molecular promissor que possui um importante papel na regulação da autofagia, conteúdo mitocondrial, e função oxidativa. No entanto, quais mecanismos permitem a comunicação entre o PGC1alfa e o ciclo circadiano ainda permanecem desconhecidos. O presente projeto de pesquisa investigará a relação entre PGC-1alfa e Rev-erb-alfa em células C2C12 (mioblastos/miotubos) in vitro (etapa 1). Posteriormente, verificaremos se os efeitos do exercício físico sobre as vias de biogênese mitocondrial, estresse oxidativo e autofagia no músculo esquelético em camundongos são dependentes da ação do eixo PGC-1alfa/Rev-erb-alfa (etapa 2). Inicialmente, será realizado a manipulação do PGC-1alfa (Knockdown e superexpressão) e Rev-erb-alfa (Knockdown, Knockout e superexpressão) em células C2C12 e avaliação do conteúdo proteico de ambas as moléculas. Posteriormente, serão utilizados camundongos wild-type e nocaute (KO) condicional do PGC-1alfa que serão submetidos ao treinamento combinado de curta duração (3 semanas). As metodologias empregadas neste projeto serão cromatografia e espectrometria de massa para avaliação da proteômica, ressonância paramagnética eletrônica para detecção de espécies reativas de oxigênio, immunoblotting, histologia, imuno-histoquímica, imunofluorescência, bioinformática, respiração mitocondrial e fluxo autofágico lisossomal. Estas avaliações funcionais e abordagens morfológicas, bioquímicas, e moleculares auxiliarão na compreensão do quadro completo da adaptação do músculo esquelético com o intuito de entender o crosstalk entre PGC-1alfa e Rev-erb-alfa. (AU)