Importância da reprogramação metabólica e persistência viral em células imunes na evolução para Artrite crônica da Chikungunya

Resumo

No Brasil, as infecções emergentes causadas por Arbovírus como Dengue e Febre Amarela (DENV e YIF) são históricas e vêm causando graves sequelas ao longo dos anos. Mais recentemente, foram relatados problemas de saúde causados pelos Vírus Zika (ZIKV) e Chikungunya (CHIKV). Embora a infecção por CHIKV possa ser assintomática, geralmente leva ao desenvolvimento da chikungunya, uma doença caracterizada pelo aparecimento de febre, erupções cutâneas e artralgia. Embora muitos dos sintomas desapareçam em uma semana, a artralgia pode persistir em quase 50% dos pacientes por até alguns anos. Os mecanismos moleculares de desenvolvimento da cronicidade desta doença são muito complexos e permanecem desconhecidos. Este projeto tem como objetivo estudar as vias imunológicas e metabólicas além dos fatores associados à artrite crônica em pacientes previamente expostos ao CHIKV. Assim, contribuindo para a compreensão do curso natural da Chikungunya desde a infecção até a cronicidade. Para responder à nossa hipótese, obteremos amostras ex vivo de pacientes naturalmente infectados com CHIKV de uma coorte da Rede Nacional de Pesquisa Clínica em CHIKV (CNPq 421724/2017), também realizaremos estudos in vitro, para avaliação de processos imunológicos/metabólicos associados ao início da resposta imune e persistência viral. Para isso, iremos caracterizar os níveis de citocinas, níveis séricos de reguladores metabólicos (adipocinas, insulina, GLP-1, grelina), expressão de mRNA dos principais fatores de transcrição envolvidos na regulação metabólica (HIF-1alpha, SREBPs, PKM2, AHR, ChREBP, LXRs, entre outros) e vias metabólicas (PFKFB3, LDH, GLUT1, SDH, OPA1, DRP1, entre outros). Também avaliaremos o metabolismo glicolítico e mitocondrial pelo Seahorse Analyzer durante a fase aguda, convalescente e crônica. Além disso, usaremos PBMCs de pacientes infectados com CHIKV para determinar o perfil de células infectadas de forma produtiva e persistente, a diversidade de monócitos e células dendríticas e fenótipos de células T, incluindo fenótipo de memória e perfil de células T CD8 e CD4 (Th1, Th2, Th17 e célula T reguladora). Ao final, determinaremos a carga viral em diferentes fases da infecção pelo CHIKV. É do nosso interesse compreender se o CHIKV altera o metabolismo das células imunes e como isso regula a resposta imune adaptativa. Além disso, queremos entender se a persistência viral desempenha um papel no estabelecimento da cronicidade e alteração metabólica. Esse trabalho contribuirá para a melhor compreensão dos mecanismos moleculares que contribuem para a evolução clínica da Chikungunya crônica e, consequentemente, desenvolvimento de terapias e diagnóstico. (AU)