Biogênese da membrana bacteriana: de mecanismos fundamentais a novos alvos para antimicrobianos

Resumo

A última década marcou uma mudança de paradigma na maneira como entendemos e estudamos a organização subcelular de bactérias. A idéia de "sacos de enzimas" foi substituída pela percepção de que processos essenciais, como replicação do DNA, divisão celular e expansão da parede celular, são realizados por complexos multiprotéicos, cuja localização subcelular e atividade são reguladas com grande precisão espaço-temporal. Apesar desses avanços, ainda não entendemos como a membrana plasmática das bactérias é construída. As enzimas e reações que produzem fosfolipídios são bem conhecidas, mas como a inserção de novos monômeros em uma membrana em expansão é organizada no espaço e no tempo, e como a síntese da membrana é coordenada com o crescimento celular são ainda questões fundamentais da biologia celular bacteriana. O principal objetivo deste projeto é fornecer uma descrição detalhada dos mecanismos moleculares da biogênese da membrana bacteriana, com foco em duas grandes questões: 1) Onde é sintetizada a nova membrana? e 2) Como as bactérias sabem a quantidade de membrana que precisa ser sintetizada? Para responder a (1), aplicaremos métodos modernos de microscopia de fluorescência para determinar a localização subcelular e a dinâmica das enzimas de síntese de fosfolipídios e se elas funcionam sozinhas ou em um complexo multiprotéico. Para responder a (2), aplicaremos um conjunto complementar de métodos (genética molecular, bioquímica, proteômica e metabolômica) para investigar a interconexão entre a síntese de lipídios e membranas e o segundo mensageiro ppGpp, um regulador chave do crescimento bacteriano. Uma vez que o controle adequado do metabolismo lipídico é essencial para a sobrevivência, um objetivo adicional deste projeto será identificar inibidores de alvos selecionados da biogênese de membranas. Aproveitaremos o conhecimento básico reunido ao longo do projeto para montar ensaios do tipo "target-based whole-cell" e rastrear diferentes coleções de compostos (pequenas moléculas, fragmentos, produtos naturais). Como os alvos escolhidos são inéditos, os inibidores identificados podem representar "leads" para classes completamente novas de antibióticos. (AU)