Caracterização da dinâmica de renovação das células estreladas hepáticas (HSC) e sua contribuição na esteatohepatite não alcoólica (NASH)

Resumo

A esteatohepatite não alcoólica (NASH) é uma ameaça crescente à saúde pública que é cada vez mais exacerbada pelo carcinoma hepatocelular. A NASH caracteriza-se por esteatose, lesão hepatocelular, inflamação e fibrose; e está associada à síndrome metabólica, incluindo diabetes tipo 2, obesidade, hipertensão e hiperlipidemia. Recentemente, desenvolvemos um modelo altamente eficiente de depleção das células estreladas hepáticas (HSCs) que pode abordar lacunas críticas na compreensão de seu papel na fibrose associada à NASH, chamado de células T JEDI (Just eGFP death inducing). Neste modelo, as células T CD8+, projetadas para matar as células que expressam a proteína fluorescente verde (GFP), são administradas a camundongos transgênicos nos quais a GFP é direcionada pelo promotor do receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas ² (Pdgfr-²), matando > 99% das HSCs. Este modelo reforça a contribuição relevante das HSCs na fibrose e nos permite fazer perguntas importantes ainda não respondidas na patogênese da NASH: 1) Como e com que rapidez as HSCs repovoam o fígado após a depleção?; e 2) Quais são as características moleculares das HSCs residentes e repovoadas em fígados normais e com NASH que contribuem para a doença? Assim, o principal objetivo desta proposta é definir a dinâmica, origem e características transcriptômicas das HSCs antes e depois de sua depleção em camundongos normais ou com NASH. Para este propósito, estabeleceremos as taxas de renovação das HSCs usando um sistema de rastreamento de linhagem em camundongos saudáveis e animais com NASH antes ou após depleção pelo modelo de células T JEDI. Após a depleção, a(s) origem(s) das HSCs repovoadas será(ão) definida(s) usando morfometria quantitativa com marcadores celulares de origem específica, juntamente com isolamento das subpopulações de HSCs e o sequenciamento de RNA em células únicas. Essa questão é nova e importante, pois não há estudos anteriores que quantifiquem a meia-vida, o turnover ou a dinâmica do repovoamento das HSCs. Espera-se que os resultados estabeleçam novos conhecimentos que mudarão a direção do campo de estudo, descobrindo os mecanismos de repovoamento das HSCs que serão vitais para antecipar estratégias clínicas para depleção de HSCs e seu impacto na homeostase hepática. (AU)