Interações da proteína PA14_04420 com proteínas relacionadas à divisão celular e síntese do envelope de Pseudomonas aeruginosa

Resumo

A regulação de processos bacterianos infecciosos, como a formação de biofilme, é influenciada pelos níveis intracelulares do segundo mensageiro bis-(3',5')-di-guanosina monofosfato cíclico (c-di-GMP). A síntese e a degradação de c-di-GMP são coordenadas pelas atividades enzimáticas antagônicas de diguanilato ciclases (DGCs), que contêm o domínio GGDEF, e de fosfodiesterases (PDEs), que abrigam os domínios EAL ou HD-GYP. Cerca de 40 proteínas com tais domínios são encontrados no patógeno oportunista Pseudomonas aeruginosa, contudo a função de muitas dessas proteínas permanece desconhecida. Dentre essas, está a proteína PA14_04420, que possui os domínios GGDEF e o domínio sensorial PAS preditos. Experimentos prévios do laboratório mostraram uma possível interação da PA14_04420 com proteínas envolvidas na divisão celular, formação da parede celular e síntese de lipopolissacarídeos. Portanto, esse projeto irá investigar o papel da proteína PA14_04420 na fisiologia bacteriana e sua possível implicação no crescimento e divisão celular de P. aeruginosa. Para isso, os potenciais parceiros de interação serão confirmados por ensaios de duplo híbrido em bactéria (Bacterial Adenylate Cyclase-based Two Hybrid - BACTH). Análises fenotípicas comparativas entre as linhagens selvagem, mutante e com superexpressão de PA14_04420, submetidas a condições variadas, serão avaliadas quanto às diferenças na motilidade, na formação de biofilme, no tempo de geração celular, adaptação, tolerância e/ou resistência a antibióticos. A localização celular de PA14_04420 e a co-localização com os parceiros de interação serão avaliadas. Além disso, a atividade catalítica de diguanilato ciclase será examinada a partir da medição dos níveis intracelulares de c-di-GMP e atividade enzimática in vitro. Assim, a elucidação do papel da PA14_04420 poderá implicar na melhor compreensão de um dos processos bacterianos fundamentais e pode indicar um novo alvo para o desenvolvimento de terapias contra infecções bacterianas.