Análise do papel fisiológico e patológico da proteína klotho em modelo celular da Doença de Alzheimer

Resumo

A proteína klotho é amplamente descrita na literatura como uma proteína neuroprotetora e antienvelhecimento, e é associada a diversas doenças do envelhecimento, incluindo doenças neurodegenerativas. Suas funções nos rins são relativamente bem elucidadas. Entretanto, apesar dos efeitos benéficos que produz no cérebro e em neurônios, seus mecanismos de ação no tecido nervoso ainda são pouco conhecidos. Nesse sentido, a proposta do presente projeto é avaliar como a proteína klotho se comporta em neurônios colinérgicos e sua associação com os processos fisiológicos e patológicos nessas células. Para esse fim, serão utilizadas células da linhagem murina N2a diferenciadas em neurônios colinérgicos. Essas células terão a expressão do gene KL e do gene APP moduladas, de modo que seja possível reconhecer processos celulares associados à proteína klotho em situações fisiológicas e patológicas. Serão analisados a expressão e localização dessa proteína nas células, os níveis de estresse oxidativo e do retículo endoplasmático, como os níveis de klotho e se associam com esses estresses e com o envelhecimento nesses neurônios, bem como mitofagia e fluxo autofágico e de que modo a superexpressão de APP afeta essas funções. O projeto utilizará técnicas de PCR em tempo real, western blot e microscopia eletrônica e de fluorescência para responder as questões suscitadas. (AU)