Envolvimento de Rictor/mTORC2 em hepatócitos e macrófagos como mediador das ações metabólicas e inflamatórias do LPS no fígado.

Resumo

A doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) é um grupo de doenças de alta prevalência que engloba desde esteatose simples (NAFL) até condições mais complexas, como esteatohepatite (NASH), cirrose e hepatocarcinoma (HCC). Apesar dos avanços recentes na compreensão da fisiopatologia da NAFLD, os mecanismos moleculares e as vias de sinalização que contribuem para o seu início e progressão ainda não são totalmente compreendidos. Diversas evidências experimentais sugerem que a disbiose intestinal e o lipopolissacarídeo (LPS) têm papel fundamental no desenvolvimento e na progressão da NAFLD, potencializando a deposição de lipídeos, a inflamação, o estresse oxidativo, a disfunção mitocondrial, entre outros fenótipos importantes que caracterizam estas doenças. Dessa forma, no presente projeto avaliaremos o envolvimento de Rictor/mTORC2 de hepatócitos e macrófagos como mediador das ações do LPS no desenvolvimento e na progressão da NAFLD induzida pela ingestão de dieta rica em frutose. Para isto, camundongos C57BL6/J com ou sem deleção de Rictor/mTORC2 em hepatócitos (albumina Cre) ou macrófagos (lisozima Cre) serão alimentados com dieta controle ou dieta rica em frutose e tratados agudamente (30, 120 e 240 min) ou cronicamente (28 dias) com LPS. Após tais períodos, camundongos serão avaliados para o peso corporal, homeostase da glicose, parâmetros séricos, massa, morfologia, conteúdo de lipídeos e de glicogênio, lipidoma, sinalização intracelular, expressão gênica, autofagia, função mitocondrial, lipogênese de novo, oxidação de glicose e de ácidos graxos, secreção de triacilglicerol, estresse oxidativo e enzimas antioxidantes, entre outros parâmetros hepáticos. Estudos in vitro serão conduzidos com hepatócitos e células de Kupffer primários com ou sem deleção de Rictor/mTORC2 isolados de camundongos naives mantidos em mono- ou co-cultura após tratamento ou não com LPS. Células serão avaliadas para a sinalização intracelular, expressão gênica, metabolismo de lipídeos e glicose, autofagia e secreção de citocinas.