Caracterização da lisina acetiltransferase NAT10 de Leishmania mexicana utilizando modelo de Saccharomyces cerevisiae

Resumo

Leishmania spp. é o agente etiológico das leishmanioses, um grupo de doenças que pode se manifestar de três formas principais: cutânea, mucocutânea e visceral. A diversidade dos casos clínicos apresentados varia de acordo com as espécies de Leishmania, sendo descritas mais de 20 espécies que podem afetar o homem. Durante seu ciclo de vida Leishmania spp. circula entre um hospedeiro invertebrado e um hospedeiro vertebrado, e para sobreviver as diferenças ambientais encontradas precisa se adaptar através de alterações na regulação da expressão gênica, tradução e metabolismo. A regulação da expressão gênica em Leishmania ocorre principalmente pós-transcricionalmente, através de mecanismos de estabilização dos mRNAs e da regulação da tradução. Diferentes modificações pós- transcricionais já foram descritas para mRNAs, como por exemplo, metilação e pseudouridilação, conjuntamente chamadas de epitranscriptoma. Recentemente foi descrito que mRNAs podem ser modificados por acetilação em células de mamíferos, modificação antes descrita somente para tRNAs e rRNAs, pela atividade da N- acetiltransferase, NAT10. A acetilação de mRNAs ocorre em citidinas e é denominada N4-acetilcitidina (ac4C), tendo grande impacto em promover aumento na estabilidade dos mRNAs de maneira geral e promover incremento na eficiência da tradução. Considerando que regulação pós-transcricional é crucial para Leishmania sp., neste projeto iremos estudar o papel da acetilação de mRNA neste parasita. Através de análises de bioinformática identificamos o gene homólogo de NAT10 em Leishmania mexicana, e demonstramos a presença de ac4C em diferentes espécies de Leishmania. Assim, para melhor entender o papel desta proteína, pretendemos neste projeto avaliar a complementação funcional do gene de NAT10 no modelo de Saccharomyces cerevisiae. Para isto, iremos: I) Obter linhagens nocautes de S. cerevisiae para o gene da NAT10; II) Clonar o gene de L. mexicana em vetores de expressão de S. cerevisiae; III) Obter linhagens nocautes de S. cerevisiae complementadas com gene da NAT10 de L. mexicana; IV) Avaliar a complementação da função de NAT10 de S. cerevisiae pela proteína de L. mexicana através de ensaios fenotípicos; V) Investigar os níveis de ac4C na linhagens de S. cerevisiae geradas. Esperamos com este projeto contribuir para melhor entendimento de um mecanismo essencial para Leishmania e complementar outros projetos em andamento em nosso grupo relacionados a caracterização de NAT10 em L. Mexicana. (AU)