Silenciamento dos genes que codificam enzimas modificadoras de histonas em estágios parasitários do Schistosoma mansoni

Resumo

A esquistossomose é uma doença parasitária negligenciada, causada pela espécie Schistosoma mansoni, e que afeta ao todo 54 países e 19 estados no Brasil. Atualmente, o único fármaco disponível para tratamento é o Praziquantel, que é efetivo apenas contra vermes adultos e que, quanto utilizado massivamente, pode levar a seleção de cepas resistentes do parasita. A epigenética permite estudar os mecanismos de patogênese de diversas doenças, dentre elas a esquistossomose, através da observação das alterações da cromatina, dentre elas as alterações das modificações pós-traducionais nas caudas das histonas. As histonas são um dos principais alvos de estudo científico pois através delas pode ocorrer o controle da transcrição gênica, sofrendo metilações, acetilações, dentre outras modificações, que podem ativar ou inibir a expressão gênica, sendo que no Schistosoma mansoni elas são importantes para a progressão do ciclo de vida do parasita, tanto no seu hospedeiro vertebrado quanto no seu hospedeiro invertebrado. Os estudos envolvendo a epigenética poderão levar ao desenvolvimento de novos fármacos mais modernos e que possam solucionar os problemas enfrentados com o Praziquantel hoje. Objetivo: o presente projeto tem como objetivo principal realizar o silenciamento dos genes Smp_316180, Smp_053140 e Smp_034000 utilizando a técnica de RNAi (dsRNA/sondas epigenéticas) nos estágios do ciclo biológico do parasita em que os genes estão mais expressos, realizar a incubação do inibidor específico para o gene Smp_034000 em paralelo e observar as possíveis alterações morfológicas e moleculares nas culturas do parasita e comparar as duas condições (geneticamente e farmacologicamente). Métodos: inicialmente iremos preparar as sondas de ds RNA, utilizando os oligonucleotídeos que serão desenhados por nós, realizaremos então as culturas de cada um dos estágios desejados, de acordo com a metodologia utilizada em nosso laboratório, incubaremos as sondas nas culturas preparadas assim como o inibidor do gene Smp_034000 e realizaremos as análises finais através de microscopia, qRT-PCR e Western-Blot.(AU)