Regulação redox das proteínas fosfatases mitocondriais dependente de manganês e investigação das suas redes de interação

Resumo

A ação de defosforilação das proteínas fosfatases é de extrema importância para o controle de diversas funções celulares. Essas enzimas podem ser encontradas em diversos compartimentos celulares como no citosol e na mitocôndria. As proteínas fosfatases citoplasmáticas são altamente reguladas por oxidantes, no entanto a regulação redox das proteínas fosfatases mitocondriais ainda é desconhecida, apesar desta organela representar um dos principais sítios de produção de oxidantes celulares. Sendo assim, pretendemos analisar a regulação redox das proteínas fosfatases mitocondriais PP2Cm (proteína serina/treonina fosfatase 2C mitocondrial) e PPTC7 (proteína serina/treonina fosfatase canônica PP2C). Adicionalmente, buscamos compreender a regulação da PP2Cm e da PPTC7 a partir da identificação e análise de interação com proteínas ligantes. Sendo assim, serão realizados estudos in silico para a identificação de proteínas ligantes e análises in vitro da interação proteína-proteína através de ensaios de pull-down. A atividade dessas proteínas fosfatases serão mensuradas na presença de agentes oxidantes e redutores. A partir da análise da interface de interação entre as proteínas fosfatases e as proteínas ligantes, buscamos identificar motivos responsáveis pela interação. Com isso, esperamos elucidar a regulação da atividade da PP2Cm e da PPTC7, assim como as vias de sinalização em que elas participam, com base na identificação de alvos proteicos. (AU)