Engenharia da via de N-glicosilação de Aspergillus oryzae

Resumo

Os fungos filamentosos são capazes de produzir e secretar uma variedade de enzimas. Aspergillus sp. e Trichoderma sp. são as principais fábricas de células fúngicas para a produção de enzimas industriais. Aspergillus oryzae é reconhecido como GRAS (geralmente considerado um organismo seguro) e tem a capacidade de secretar uma grande quantidade de proteínas. Portanto, A. oryzae tem sido usada como uma fábrica de células microbianas de baixo custo para a produção de proteínas recombinantes e tem o potencial de ser projetada para produzir proteínas terapêuticas. No entanto, um gargalo na produção de proteínas humanizadas em A. oryzae é o padrão N-glicano das glicoproteínas, que é significativamente diferente do humano. A N-glicosilação desempenha um papel fundamental na estabilidade, secreção, dobramento e atividade das proteínas e, portanto, pode ser uma barreira para a produção de proteínas. Uma alternativa viável é a remodelação da via de N-glicosilação em fungos filamentosos para que as proteínas recombinantes produzidas neste hospedeiro recebam cadeias de N-glicano semelhantes às encontradas em humanos. O objetivo aqui é projetar cepas de A. oryzae nas quais a maioria das glicoformas parecem ser espécies GlcNAcMan5GlcNAc2, que é a estrutura central para a síntese de glicano híbrido. Para isso, iremos deletar e superexpressar os genes envolvidos na montagem e processamento do N-glicano. Para monitorar as espécies de N-glicano predominantes em A. oryzae, a beta-xilosidase GH3 (AN8401; BxlB) de A. nidulans foi usada como uma proteína recombinante modelo. (AU)