Determinação da velocidade de ação de novos hits contra formas assexuadas de P. falciparum in vitro

Resumo

A busca por novos fármacos para o tratamento da Malária humana continua em destaque na luta contra esta doença e representa um desafio constante, pois os parasitos conseguem se adaptar e desenvolver mecanismos de resistência, tornando-os menos sensíveis aos medicamentos mais recentes. A resistência aos derivados de artemisinina, caracterizada pelo atrasado no tempo de eliminação dos parasitos, é um exemplo recente da forma como os parasitos conseguem desenvolver resistência aos antimaláricos. Sendo assim, é urgente o desenvolvimento de novos compostos para combater a propagação da malária resistente a medicamentos. Neste contexto, a busca por novos candidatos com um modo de ação rápida garantirá um alívio rápido dos sintomas para o paciente, além de reduzir rapidamente a parasitemia, o que poderia minimizar a ocorrência de mutações que levam a novos mecanismos de resistência aos antimaláricos. Recentemente, o nosso grupo, em colaboração com o time do MMV, desenvolveu um novo método para fornecer informações sobre a velocidade de ação de novos compostos (dados em fase de publicação). Este método utiliza a técnica de SYBR Green, onde placas de cultura com os compostos testes serão incubadas durante diferentes tempos (24h,48h e 72h). Além disso, por utilizar marcação de DNA, foi associado a este ensaio a avaliação da morfologia dos parasitos a partir da microscopia ótica, o que visa eliminar resultados falsos devido a marcação de parasitos não viáveis pela técnica de SYBR (detalhes dos métodos no item 6.2 do projeto JP). Este teste será aplicado neste projeto e visa identificar rapidamente compostos com modo de ação rápida ainda nos estágios iniciais de desenvolvimento. Neste sentido, compostos hits, pertencentes as classes químicas de Pseudoceratidina e hidrazinobenzimidazol, serão avaliados in vitro quanto ao seu modo de ação contra o estágio assexuado de P. falciparum (cepa 3D7). Outros compostos pertencentes as classes backups do CIBFar e a novas séries poderão ser incluídos neste projeto. Além disso, com este projeto vamos padronizar a avaliação da morfologia utilizando a técnica de high content screening (HCS), que é um ensaio simples e rápido que utiliza marcadores clássicos de DNA (SYBR Green I), visando a comparação com a microscopia ótica. Os dois tipos de ensaio permitem avaliar a evolução dos parasitos comparando a morfologia com o grupo não tratado. O desenvolvimento deste projeto de IC permitirá a caracterização do modo de ação dos novos candidatos visando a identificação de compostos com o modo de ação rápida para o desenvolvimento de novos fármacos. (AU)