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Expressão heteróloga e purificação da CaneCPI-5

Processo: 21/09164-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de setembro de 2021
Vigência (Término): 31 de agosto de 2023
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Flavio Henrique da Silva
Beneficiário:Luiz Felipe Botão Tavolaro
Instituição-sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:19/26070-1 - Modulação da película adquirida do esmalte e do biofilme para o controle da perda mineral dentária: desvendando mecanismos e possibilitando terapias, AP.TEM
Assunto(s):Cárie dentária   Erosão dentária   Esmalte   Proteínas recombinantes   Genética molecular

Resumo

A atividade do bolsista será concentrada na expressão heteróloga e purificação da CaneCPI-5. Para a expressão, será utilizada a cepa bacteriana E. coli Rosetta (DE3), transformada com o plasmídeo pET28aCaneCPI-5. A proteína expressa será purificada da fração solúvel de culturas bacterianas induzidas por IPTG (Isopropil-beta-D-Thiogalactosidio), submetidas a centrifugação e sonicação. A purificação será feita por cromatografia de afinidade, utilizando colunas contendo resina de níquel Ni-NTA Superflow (Qiagen), conforme descrito previamente. Para dar suporte ao projeto e otimizar a produção da CaneCPI-5, serão testados meios de cultura mais baratos (meio autoindutivo com lactose e contendo soro de leite), assim como expressão na levedura Pichia pastoris, otimizando códons para expressão nesse sistema. A expressão e purificação serão realizadas continuamente ao longo do projeto, de forma a suprir a alta demanda, uma vez que a proteína será utilizada nos 14 subprojetos que constituem o temático. Além dessas atividades, o bolsista deverá auxiliar o coordenador do grupo (Prof. Flavio Henrique Silva) na organização do laboratório, compras e atendimento de demandas de estudantes.

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