Análise funcional da deleção de PIMREG em células repórter para reparo de dano no DNA

Resumo

PIMREG (PICALM interacting mitotic regulator) é uma proteína localizada majoritariamente no núcleo e enriquecida no nucléolo, sendo um substrato do complexo promotor da anáfase/ciclossomo (APC/C), que controla a transição da metáfase para a anáfase. Embora sua função na carcinogênese ainda seja pouco conhecida, sabe-se que essa proteína está presente em diversos tipos de câncer, sendo a expressão mais elevada em glioblastoma. Dados recentes do grupo sugerem que PIMREG pode estar relacionada à sinalização de resposta a dano e reparo do DNA, já que foi visto um aumento de seus níveis proteicos em células de glioblastoma submetidas ao estresse replicativo induzido por quimioterápicos. Buscando compreender a função de PIMREG na sinalização da via de dano e reparo de DNA, será feito o nocaute do gene, por meio do sistema CRISPR/Cas9 (plasmídeo PX458), em células da linhagem U2OS que apresentam um sistema repórter para reparo do DNA por meio de HR (homologous recombination). Estas células serão utilizadas em ensaios que visam identificar o envolvimento da proteína de interesse no reparo de quebra de dupla fita do DNA. Com a maior compreensão da função de PIMREG no reparo de dano de DNA, espera-se elucidar possíveis mecanismos de resistência de células tumorais frente ao tratamento quimioterápico e radioterápico. (AU)