Identificação do CAR de maior especificidade pelo Cryptococcus gattii através de células Jurkat

Resumo

O Cryptococcus gattii é uma levedura encapsulada do gênero Cryptococcus e após seus propágulos serem inalados é capaz de promover a criptococose em humanos. A infecção é persistente no tecido pulmonar de indivíduos imunocompetentes, e pode progredir para uma meningite criptocócica e disseminação para outros tecidos. O C. gattii é caracterizado como um patógeno emergente de zonas endêmicas, com distribuição geográfica em áreas tropicais, subtropicais e zonas temperadas. A cápsula polissacarídica associada à parede fúngica atua como um fator chave de virulência de Cryptococcus spp, pois é capaz de evadir a resposta imune inata do hospedeiro por ação de seus componentes, como glucuronoxilomanana (GXM) e, em proporções menores, glucuronoxilomanogalactana (GXMGal) e manoproteínas. A evasão da resposta ocorre principalmente na interferência da função de linfócitos T, além de afetar a proliferação celular de macrófagos, desencadear apoptose, induzir a desregulação de citocinas, entre outros efeitos como a adesão do patógeno com células epiteliais pulmonares. Para uma resposta antifúngica protetora, as células T CD4+ diferenciadas nos perfis T helper (Th) do tipo 1 (Th1) e 17 (Th17) são importantes na manutenção de um microambiente no sítio de infeção favorável ao hospedeiro. Os perfis celulares Tc1 e Tc17, oriundos da diferenciação das células T CD8+, liberam grânulos citotóxicos e mediadores pró-inflamatórios de suma importância na resposta imune efetora no sítio da infecção fúngica invasiva. Com isso, a atual proposta visa utilizar componentes da superfície celular do Cryptococcus gattii como alvos para redirecionar as células T citotóxicas com função efetora sobre esse patógeno. O redirecionamento de células T será promovido pelo receptor antigênico quimérico (CAR) que contém uma porção de reconhecimento de GXM oriundo de um scFv de anticorpo monoclonal anti-GXM, sendo denominado GXMR-CAR. Nesse sentido, o objetivo do trabalho é modificar células Jurkat com diferentes CAR específicos para C. gattii visando comparar o efeito na ativação celular entre os receptores em estudo. Para isso, os diferentes construtos de GXMR-CAR serão utilizados na transfecção de células HEK-293FT, juntamente com plasmídeos auxiliares, visando a produção de partículas lentivirais que contenha construtos de GXMR-CAR. Essas partículas lentivirais serão utilizadas na transdução de células Jukart para a expressão de GXMR-CAR de forma constitutiva. Em seguida, células Jukart transformadas com os diferentes constructos do CAR serão co-cultivadas com C. gattii para avaliar a produção de mediadores pró-inflamatórios. Esses objetivos específicos possibilitarão distinguir a capacidade de diferentes construtos de GXMR-CAR em induzir a ativação de células T modificadas frente ao C. gattii. (AU)