Caracterização e engenharia de novos fatores de transcrição envolvidos na resposta ao estresse durante a produção de celulases por Trichoderma reesei

Resumo

As enzimas lignocelulolíticas são de fundamental importância em processos de geração de biocombustíveis a partir de biomassa vegetal. O fungo filamentoso Trichoderma reesei é um grande produtor de holocelulases, possuindo um dos mais inteligentes sistemas celulolíticos. A expressão gênica dessas enzimas é finamente controlada por uma série de fatores de transcrição, que vêm sendo utilizados em estratégias de melhoramento genético desse fungo para elevar a produção de celulases. Além disso, alguns estudos demonstram uma relação entre estresse osmótico e hipoxia e a produção de celulases, porém pouco é conhecido sobre essa regulação a nível transcricional. Esse projeto tem como objetivo caracterizar novos fatores de transcrição envolvidos na resposta ao estresse em T. reesei e seus papeis na regulação da produção de celulases. Para isso, uma série de fatores de transcrição potencialmente envolvidos na degradação de biomassa serão identificados através de análises in silico de dados de RNA-seq e os homólogos de reguladores de Saccharomyces cerevisiae relacionados à resposta ao estresse serão posteriormente deletados em T. reesei para verificação de suas respectivas funções na produção de celulases e na resposta ao estresse. Os fatores de transcrição serão fusionados à proteína GFP para avaliar sua localização subcelular e sua interação com o DNA por meio de imunoprecipitação de cromatina. Adicionalmente, os fatores de transcrição mais promissores serão engenheirados através de fusão ao domínio de ligação ao DNA do repressor Cre1 para aumentar a produção de celulases. Os dados obtidos possibilitarão uma melhor compreensão do comportamento das enzimas celulolíticas produzidas por T. reesei, contribuindo para construção de linhagens com maior produção de celulases. (AU)