Fenótipo endotelial como determinante da relação genótipo/fenótipo na Síndrome de Marfan

Resumo

A Síndrome de Marfan (SMF) é uma doença autossômica dominante do tecido conjuntivo, que acomete principalmente os sistemas esquelético, ocular e cardiovascular, sendo o Aneurisma de Aorta responsável pela maior parte da morbi-mortalidade. SMF é resultante de mutação no gene da fibrilina-1 (FBN1), um dos principais componentes estruturais da matriz extracelular e responsável pela regulação da atividade do TGF². A SMF apresenta importante variabilidade clínica e associação ainda pouco clara entre genótipo e fenótipo. Um fator potencialmente associado a esta variabilidade é a classe da mutação, Haploinsuficiente (HI) ou Dominante Negativo (DN), que sabidamente se correlaciona à severidade da SMF. No entanto, não há um entendimento de mecanismos integrativos de fatores comuns aos distintos aspectos da doença. A disfunção endotelial é um mecanismo emergente e pode se associar ao desenvolvimento de aneurismas na SMF, embora não esteja claro se o aumento de NO é causa ou consequência da dilatação. Nossa hipótese é que o fenótipo endotelial é um mecanismo no entendimento da relação entre distintos genótipos e fenótipos cardiovasculares, tanto por marcadores de disfunção endotelial como pela comunicação alterada em células endoteliais e células de músculo liso. O principal objetivo é validar vias de sinalização e função parácrina de células endoteliais em modelo de Células Tronco Pluripotentes Induzidas Humanas (hiPSCs) portadoras de mutações classificadas como HI e DN causadoras da SMF. Os objetivos específicos são: 1) validar o modelo de hiPSCs em células endoteliais (EC) e células musculares lisas (SMC) portadoras de mutações classificadas como HI e DN; 2) investigar, em EC derivadas de hiPSCs (obtidas no objetivo 1) submetidas a shear stress, a influência de distintas mutações causadoras de SMF em marcadores bioquímicos, moleculares e funcionais da EC; 3) estabelecer modelo de co-cultura entre EC-hiPSC e SMC-hiPSC e avaliar ainfluência de mutações HI e DN na dinâmica da sinalização entre os dois tipos celulares. Estes estudos poderão contribuir para elucidar um novo mecanismo de doença, a disfunção endotelial, como determinante de aspectos fenotípicos da SMF. (AU)